[发明专利]一种同时测定牛奶中单诺沙星与氟甲喹的荧光方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种荧光光谱快速同时测定牛奶中单诺沙星与氟甲喹含量的方法，属于乳制品快速检测技术领域。

背景技术

近年来，随着我国居民收入的提高和对乳制品消费观念的转变，食用乳制品的消费者人数逐年增加，我国的乳制品行业得到迅猛发展。然而从目前国内奶业的生产和加工状况来看，我国乳制品的质量与安全现状不容乐观。首先由于我国乳牛的农场化养殖水平较低，大部分原料乳（约占80%）是来自乳牛散养户，因此导致原料乳品质波动性很大。同时存在的乳中掺假、滥用抗生素等诸多问题也使得乳制品安全性存在重大隐患。

抗生素是由细菌、霉菌或其它微生物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类物质。自1940年青霉素首次应用于临床起，抗生素的种类已达几千种。而临床上常用的约有几百种。抗生素在奶牛饲养业中被广泛使用医疗乳房炎等疾病。由于抗生素在常压下不受物理方法的破坏，因此如果对奶牛用药不当或滥用抗生素，牛乳中就会发生抗生素残留现象，并进一步转移到人体内。长期食用残留有抗生素的食品会引起人体的过敏、肝肾损伤等毒副作用。

单诺沙星（DANO）是一种具有广谱抗菌活性的合成抗生素，它属于喹诺酮类药物的衍生物-氟喹诺酮类。氟甲喹（FLU）也是抗菌性的药物，属于喹诺酮类药物。它们的机理是作用是抑制细菌DNA旋转酶，使酶不能在DNA双链上引入切口，从而阻止细菌的代谢繁殖。目前，这两种抗生素已经被广泛用于食用动物的治疗、防治疾病从而增加动物的产量，但是过量使用或使用不当会造成动物源性产品的药物残留，会对人体的中枢神经系统及关节等造成危害，从而引起人们广泛关注。随着奶牛饲养业的发展，喹诺酮类抗生素在预防和治疗奶牛疾病方面得到广泛应用，牛乳中抗生素的残留问题也随之而来，其不仅会对人的健康带来很大危害，而且对乳制品企业带来经济损失，因此严格控制牛奶中的抗生素残留量是很重要的一步。欧盟对鲜牛乳中四种喹诺酮类抗生素的残留量已经有明确的规定，单诺沙星（30μg/kg）、氟甲喹（50μg/kg）、恩诺沙星（100μg/kg）和麻保沙星（μg/kg）等。

目前，牛乳中抗生素残留量的检测方法主要有微生物检测法（TTC法、纸片法等）、理化检测法（HPLC法、LC-MASS法等）和免疫学分析法（ELISA法等），但这些方法各自都有一定的缺点。微生物检测法的缺点是检测周期长，操作复杂等；理化检测法的缺点是前处理繁冗，耗时长等；免疫检测法则是对试剂选择性高，很难同时分析多种成分，对结构类似的化合物有一定程度生物交叉反应等。在众多分析方法中，荧光光谱法因其快捷简便、高灵敏度等优点而成为很好的选择，国外也已有学者利用此方法对牛乳中单组分抗生素（DANO）残留量进行检测分析，但并没有对牛乳中DANO和FLU两种抗生素的同时检测的报道，所以本发明采用荧光光谱法实现对牛乳中的DANO和FLU进行同时检测。

对于本发明所研究的两种抗生素而言，因其具有荧光基团，在吸收光后能放射出荧光，所以使得荧光光谱法检测喹诺酮抗生素成为可能。单诺沙星（DANO）与氟甲喹（FLU）都属于喹诺酮类药物，单诺沙星在激发波长(λex)/发射波长(λem)为280/440nm时出现最高荧光峰;氟甲喹的荧光出峰位置则在激发波长/发射波长为320/360nm。但是由于牛奶体系较为复杂，含有许多具有荧光性的物质，如蛋白质（λex/λem=290/320nm）、维生素A（λex/λem=321/410nm）、美拉德产物（λex/λem=360/410nm）和核黄素（λex/λem=360/410nm）等化合物，这些荧光物质会与所研究的抗生素的荧光信号发生光谱重叠，尤其是荧光强度高的蛋白质对分析物的荧光信号影响特别严重，所以去除蛋白是本文中必要的一步。再应用化学计量学的方法对荧光光谱图进行处理解析之后，就可排除其它荧光组分的干扰（美拉德产物等），建立最佳校正模型和快速检测方法。本文中共采用了两种计量学方法：偏最小二乘法回归（PLS2）和偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）。偏最小二乘法主要是用于定量分析，对未知样品中的某种组分含量进行预测，它在分解光谱矩阵时同时考虑了浓度矩阵的影响。偏最小二乘判别分析法主要是用于定性分析，判别单个未知样品与已知样品组之间的关系。

发明内容

针对上述情况，本发明的目的是提供一种利用荧光光谱并结合化学计量学的方法，建立快速且同时检测牛乳中单诺沙星和氟甲喹残留量的方法。

一种同时测定牛奶中单诺沙星与氟甲喹的荧光方法，包括以下步骤：