[发明专利]一种同时测定牛奶中单诺沙星与氟甲喹的荧光方法

权利要求书

1.一种同时测定牛奶中单诺沙星与氟甲喹的荧光方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）校正集样本的收集：在不含单诺沙星与氟甲喹的牛奶样本中加入不同量的单诺沙星与氟甲喹，使牛奶体系中单诺沙星的浓度在0-56μg L^-1范围内，氟甲喹的浓度在0-100μg L^-1范围内，加入三氯乙酸除去牛奶中蛋白质，收集澄清的校正集样本。

（2）校正集样本荧光光谱的测定：使用荧光分光光度计扫描样本，获取荧光光谱数据。

（3）校正模型的建立：利用多元校正化学计量学方法，分别构建校正集样本中单诺沙星与氟甲喹含量与荧光光谱数据之间关系的数学模型，用于样本单诺沙星与氟甲喹含量的预测并判断出阴性与阳性样品。

（4）校正模型的验证：取已知单诺沙星与氟甲喹含量的牛奶验证集样本，在与步骤（2）中相同条件下扫描获取荧光光谱数据，根据已建立的校正模型计算样本中单诺沙星与氟甲喹含量以及对阴性与阳性样本进行分类。

（5）校正模型的应用:采集待测样本的荧光光谱数据，获取特征光谱信息，将该光谱信息输入已建立的校正模型中，筛选出阴性样本并计算出牛奶样本中单诺沙星与氟甲喹的含量。

2.根据权利要求1所述的一种同时测定牛奶中单诺沙星与氟甲喹的荧光方法，所述的步骤（1）中加入三氯乙酸除去牛奶中蛋白质的方法为加入浓度为50%（w/v）的三氯乙酸，至蛋白质沉淀，静置5min，离心，过滤。

3.根据权利要求1所述的一种同时测定牛奶中单诺沙星与氟甲喹的荧光方法，所述的步骤（2）中荧光光谱数据的采集条件为：以320nm为激发波长，以330-530nm为发射波长范围，以5nm为激发波长和发射波长的狭缝宽度，以1200nm/min为进行光谱扫描速度，每个样本作3次平行扫描，取平均扫描数据作为样本的荧光光谱数据。

4.根据权利要求1所述的一种同时测定牛奶中单诺沙星与氟甲喹的荧光方法，所述的多元校正化学计量学方法为偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）和偏最小二乘法（PLS），使用的计算机软件为Unscrambler软件。

5.根据权利要求1所述的一种同时测定牛奶中单诺沙星与氟甲喹的荧光方法，所述的阴性牛奶样本为牛奶体系中单诺沙星含量小于最大残留量30μg L^-1、氟甲喹含量小于最大残留量50μg L^-1的样本；所述的阳性样本为牛奶体系中单诺沙星含量大于最大残留量30μg L^-1、氟甲喹含量大于最大残留量50μg L^-1的样本。