[发明专利]一种乌拉贝宁的提取纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物提取技术领域，涉及一种乌拉贝宁的提取纯化方法。

背景技术

乌拉贝宁（Uralenin），又名爱斯形刺桐素B，分子式为C₂₀H₂₀O₆，分子量为356.37，mp.217-218℃，主要存在于豆科植物爱斯形刺桐Erythrina sigmoidea Hua的茎皮.、甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的地上部分及叶中，其中甘草叶中含量最高。药理研究表明，乌拉贝宁具有较强的抗格兰阳性菌作用，对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌浓度为50ppm；在固体培养基中对环状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等的抑菌作用比Sigmoidin A强，在液体培养基的抑制作用比Sigmoidin A弱。另外，乌拉贝宁还具有抗氧活性，可抑制巨噬细胞超氧化物的产生。

现有技术中，尚没有适用于高纯度乌拉贝宁工业化大生产的制备工艺报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种乌拉贝宁的提取纯化方法，这种方法不仅避免了大量有毒试剂的使用，提高了乌拉贝宁的提取率，而且成本低、方法简便经济。

本发明的技术方案是：

1）以甘草叶为原料，粉碎，加入萃取釜，采用超临界CO₂萃取，以丙酮为夹带剂，萃取2-5小时，解析萃取液回收试剂，得萃取物；

2）将萃取物按比例加入硫酸铵和乙醇双水相系统，加热混合均匀，分为上、下两相，加下相降温、结晶回收硫酸铵晶体，取上相加乙酸乙酯、水和氯化钠，混合均匀，取含有乌拉贝宁的上相，减压浓缩；

3）将浓缩浸膏加入聚酰胺树脂柱，乙醇水溶液洗脱，脱色、重结晶得乌拉贝宁。

步骤1）中所述夹带剂为体积百分比65-80%的丙酮水溶液，加入量为药材量的15-28%。

步骤1）中所述超临界CO₂萃取过程中，设定萃取釜压力为24-36MPa，温度为46-60℃，分离釜压力为5-9MPa，温度为30-45℃。

步骤2）中所述浓缩液与乙醇体积比为（6～9）：1，加入的乙醇质量分数为18-26%，加入的硫酸铵质量分数为10-22%；分相温度为30-50℃，静置时间为4-8小时。

步骤2）中所述乙酸乙酯反萃取中，分相温度为20-30℃，静置时间为2-4小时。

步骤3）中所述聚酰胺树脂为100-200目，用量是药材量的1/3-1/2（V/W），用3-8BV体积百分比为65-85%的乙醇水溶液洗脱。

步骤3）中所述重结晶前用活性炭脱色，所述活性炭与乌拉贝宁的质量比为5:1-10:1，所述重结晶溶剂为体积百分比为20-30%的乙醇水溶液，于0℃-4℃条件下析晶。

本发明的有益效果在于：本发明采用超临界CO₂萃取乌拉贝宁，具有萃取率高、高效无污染等特点；采用双水相萃取条件温和、操作安全、乙醇和硫酸铵易回收重复利用，不会造成污染；结晶前采用活性炭脱色，以除去产品中的杂质，提高产品纯度，增加产品稳定性，避免产生副作用等。

具体实施方式：

实施例1：

将甘草叶粉碎，取5kg粗粉投入萃取釜中，加热萃取釜至50℃、解析釜达到32℃，通入CO₂，流量为20L/h，打开加压泵升高萃取釜压力至29MPa、解析釜压力至9MPa，关闭CO₂钢瓶阀门。打开循环，加入80%的丙酮作为夹带剂（加入量为药材量的15%）至夹带剂储罐中，打开夹带剂高压泵阀门，使夹带剂泵入萃取釜，保持恒压、恒温萃取2.5h，收集从解析釜放出的萃取物，加入硫酸铵和乙醇双水相系统，浓缩液与乙醇体积比为9：1，加入的乙醇质量分数为18%，加入的硫酸铵质量分数为22%，加热混合均匀，在30℃条件下放置4h，静置，分为上、下两相，取下相降温、结晶回收硫酸铵晶体，取上相加乙酸乙酯、水和氯化钠，其中乙酸乙酯的质量分数为25%，氯化钠的质量分数为10%，余量为水，混合均匀，系统在20℃下静置2h，分相，取含有乌拉贝宁的上相，减压浓缩得浸膏，将浓缩浸膏加入聚酰胺树脂柱，用6BV70%乙醇溶液洗脱，收集含有乌拉贝宁的流分，洗脱液加入10g药用活性炭煮沸10分钟，趁热过滤，滤液冷却至4℃静置，析晶，用20%乙醇溶液重结晶，干燥即得得产品，经HPLC检测，其纯度为96.7%。

实施例2：