[发明专利]高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制法

权利要求书

1.一种高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制法，是以新鲜猪脑为原料经过提取步骤和纯化步骤进行制备，其特征在于：

所述提取步骤包括制丙酮粉步骤、组织总脂的抽提步骤、folch分配步骤、脱病毒步骤、酸水解病毒灭活步骤；

所述纯化步骤包括脱盐步骤、硅胶层析步骤、反相层析步骤、浓缩步骤、丙酮重结晶步骤、冻干步骤。

2.如权利要求1所述的制法，其特征在于，

所述制丙酮粉步骤为：将新鲜猪脑捣碎，于-5--15℃用丙酮处理，得沉淀，在70-90℃烘烤，制得丙酮粉；

所述组织总脂的抽提步骤为：将丙酮粉以体积比3∶1-1∶3的氯仿甲醇混合液提取2-5次，得抽提液；

所述folch分配步骤为：将抽提液用0.05-0.15体积的水进行folch分配，有机层弃去，保留水层，得上清液；

所述脱病毒步骤：将上清液加氢氧化钠1-10重量份，于室温下水解3-7小时，醋酸中和至pH7-9，用截留分子量为3000-50000的分子膜截留，得滤液；

所述酸水解病毒灭活步骤：将滤液用醋酸调节pH至3.5-4.5，于50-70水解8-12小时，水解液冷却，用氢氧化钠调pH至中性，离心，干燥，得总脂粗品干粉。

3.如权利要求2所述的制法，其特征在于，

所述制丙酮粉步骤为：将新鲜猪脑捣碎，于-10℃用丙酮处理，得沉淀，在80℃烘烤，制得丙酮粉；

所述组织总脂的抽提步骤为：将丙酮粉以体积比2∶1的氯仿甲醇混合液提取3次，得抽提液；

所述folch分配步骤为：将抽提液用0.1体积的水进行folch分配，有机层弃去，保留水层，得上清液；

所述脱病毒步骤：将上清液加氢氧化钠5重量份，于室温下水解5小时，醋酸中和至pH8，用截留分子量为3000-50000的分子膜截留，得滤液；

所述酸水解病毒灭活步骤：将滤液用醋酸调节pH至4，于60℃水解10小时，采用巴氏灭菌法，水解液冷却，用氢氧化钠调pH至中性，离心，干燥，得总脂粗品干粉。

4.如权利要求2或3所述的任一制法，其特征在于，所述纯化步骤为：

所述脱盐步骤：离子交换柱脱盐，214nm紫外监测，电导率监测，水平衡后，将总脂粗品干粉上柱，用水洗脱，收集紫外峰部分，得水相收集液；

所述硅胶层析步骤：体积比为3-9∶1-3∶0.1-0.3的氯仿、甲醇、水混合液平衡硅胶柱，将水相收集液上柱后，用上述氯仿、甲醇、水混合液洗脱，TLC检测收集洗脱液，得收集液；

所述反相层析步骤：将收集液过反相层析凝胶柱，经水平衡，分别用80％甲醇分离和100％甲醇洗脱，214nm紫外监测，收集紫外洗脱峰，得反相收集液；

所述浓缩步骤：将反相收集液浓缩、冷却析晶，过滤、得单唾液酸四己糖神经节苷脂钠粗品；

所述丙酮重结晶步骤：将单唾液酸四己糖神经节苷脂钠粗品用丙酮重结晶，得结晶固体；

所述冻干步骤：将结晶固体用水溶解后用0.22m滤膜除菌过滤，冷冻干燥、得半成品，经外包装、装箱得成品。

5.如权利要求4所述的制法，其特征在于，所述纯化步骤为：

所述离子交换柱为HIPREP^TM柱；

所述氯仿、甲醇、水混合液的体积比为3∶1∶0.1；

所述反相层析凝胶柱为Source RPC30柱。

6.如权利要求1所述的制法，其特征在于，所述新鲜猪脑包括如下步骤处理：

在新鲜状态下于≤-18℃冷冻保存一年；

猪脑外观应完整、清洁，色泽新鲜，无异味，无污染杂质；

猪脑剖开后观察，应质地良好，无肿块、萎缩、坏死、出血、炎症等病变。