[发明专利]流脑多糖-蛋白质缀合疫苗及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种流脑多糖-蛋白质缀合疫苗及制备方法。 

背景技术

奈瑟氏脑膜炎球菌（Neisserza meningitides）是全球细菌性脑膜炎的主要原因。在最近的30年中，地方性脑膜炎球菌疾病的发病率在发展中国家为每100，000人中10到25人（Reido，F.X.等人，1995）。病例致死率在10到20%之间。 

病原脑膜炎球菌被多糖荚膜所包被，附着在生物体外膜表面。基于荚膜多糖的免疫学特异性，已经鉴定出13种不同的脑膜炎球菌血清型。这13个血清型中的5个引起了大部分脑膜炎球菌疾病；它们包括血清型A、B、C、W-135和Y。血清型A引超大部分流行性疾病。血清型B、C和Y引起大多数地方性疾病和疾病的区域性爆发。 

人类是唯一已知的脑膜炎奈瑟氏球菌的天然携带者。脑膜炎球菌可被持续携带几个月，脑膜炎球菌通过直接接触或通过空气飞沫传播。对入侵的脑膜炎球菌的宿主防御依赖于补体介导的溶菌作用，而在其中发挥作用的血清抗体大部分是针对荚膜多糖的。 

基于脑膜炎球菌多糖的疫苗已经被描述，其引起针对荚膜多糖的免疫应答。这些抗体可以对血清型特异性脑膜炎球菌引起补体介导的溶菌作用。脑膜炎球菌多糖疫苗显示对儿童和成人有效，但对于婴儿和幼儿其效能有限。对年幼群体，此多糖的后继给药产生弱加强应答或无加强应答。脑膜炎球菌多糖疫苗的保护期不能持续很长，并且据估计对成人和大于4岁的儿童而言为3到5年。对1至4岁的儿童而言保护期少于3年。 

多糖能与主要组织相容性复合体分子结合，而这是抗原呈递和刺激T-辅助淋巴细胞的前提条件，也即它们是非T。细胞依赖性抗原。多糖能够不需T-辅助淋巴细胞的辅助而刺激B淋巴细胞产生抗体。由于对B淋巴细胞的非T-细胞依赖性刺激，这些抗原免疫后缺乏记忆诱导。在成人体内，多糖抗原可以产生非常有效的非T-细胞依赖性应答，但在婴儿和幼儿的不成熟免疫系统中这些非T-细胞依赖性应答却很弱。 

非T-细胞依赖性多糖抗原可以通过将多糖共价连接至蛋白质分子（“载体”或“载体蛋白质”）上而转变为T-细胞依赖性抗原。与缀合疫苗的多糖组分结合的B细胞可以被肽特异的T辅助细胞激活，所述肽为缀合的载体蛋白质的一部分。对载体蛋白质的T-辅助细胞应答可以增加针对多糖的抗体的产生。 

目前国外已经上市的流脑结合疫苗中，W-135型及Y型流脑多糖均在片段化后采用连接接头与载体蛋白进行连接（如：中国专利CN100556459C描述的以TT为载体和W性或Y型寡糖结合的疫苗，中国专利CN1889975A描述的以CRM197为载体和W型或Y型寡糖结合的疫苗）。由于载体蛋白和天然多糖并没有活性基团可以反应，连接接头上是一种有机分子， 一端具有和蛋白反应的化学活性，另一端具体和多糖连接的化学活性。已经被采用的接头有：己二酸二酰肼，1,4-丁二胺，N-乙酰高半胱氨酸硫内酯等,有些接头和蛋白或多糖连接反应之前，必须对蛋白和多糖进行衍生。这些接头一般是惰性的，也就是不会与人体蛋白质或其他大分子在生理条件下产生化学反应，而且在结合疫苗的制备工艺中也会被尽量的去除，但是这些接头存在于结合产物中，可引起人体免疫系统来针对这些接头产生免疫反应，会产生相应的无效抗体。目前用于流脑多糖结合疫苗不但采用接头的工艺，而且需要对多糖进行解聚以降低其分子量，但是在这个过程中，多糖会有损失，从而增加了产品的总体生产成本。 

中国专利CN1889975A描述的以CRM197为载体和W型或Y型寡糖结合的疫苗的分子量一般在200KD以下。一般认为大分子量的免疫原会产生更强的免疫反应。因此有必要开发出分子量较大的免疫缀合物。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种流脑多糖-蛋白质缀合疫苗。 

本发明的第二个目的是提供一种流脑多糖-蛋白质缀合疫苗的制备方法。 

本发明的第三个目的是提供一种多价流脑多糖-蛋白质缀合疫苗。 

本发明的技术方案概述如下： 

流脑多糖-蛋白质缀合疫苗，其特征是用[S-C]n-[N-P]m表示，其中S表示一种流脑多糖分子，C表示该流脑多糖分子中引入醛基的C原子，P表示CRM197蛋白分子，N表示该蛋白分子中赖氨酸侧链氨基的N原子；n和m大于1且小于10；所述S的分子量>100KD；所述[S-C]n-[N-P]m的平均分子量在200KD到2000KD之间，所述流脑多糖为W-135型和Y型流脑多糖中的至少一种，所述流脑多糖为奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖的简称。