[发明专利]流脑多糖-蛋白质缀合疫苗及制备方法

权利要求书

1.流脑多糖-蛋白质缀合疫苗，其特征是用[S-C]n-[N-P]m表示，其中S表示一种流脑多糖分子，C表示该流脑多糖分子中引入醛基的C原子，P表示CRM197蛋白分子，N表示该蛋白分子中赖氨酸侧链氨基的N原子；n和m大于1且小于10；所述S的分子量>100KD；所述[S-C]n-[N-P]m的平均分子量在200KD到2000KD之间，所述流脑多糖为W-135型和Y型流脑多糖中的至少一种，所述流脑多糖为奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖的简称。

2.根据权利要求1所述的流脑多糖-蛋白质缀合疫苗，其特征是所述[S-C]n-[N-P]m的平均分子量在200KD到700KD之间。

3.多价流脑多糖-蛋白质缀合疫苗，其特征是包括权利要求1或2流脑多糖-蛋白质缀合疫苗，还包括A型流脑多糖与载体蛋白结合的缀合物和C型流脑多糖与载体蛋白结合的缀合物。

4.流脑多糖-蛋白质缀合疫苗的制备方法，其特征是包括如下步骤：

（1）将纯化的流脑多糖溶解于水或乙酸钠缓冲液中，按照流脑多糖与高碘酸盐质量比为1：0.02-0.2的比例加入高碘酸盐，活化反应后，超滤或透析去除未反应的高碘酸盐，使流脑多糖上相邻的双羟基被氧化成醛基，得到引入醛基的活化流脑多糖；

（2）按质量比为0.5-3：1的比例将步骤（1）获得的所述活化流脑多糖和纯化的载体蛋白CRM197溶解于磷酸盐缓冲液中，调节pH到6.5和8.5之间，以氰基硼氢化钠:醛基摩尔比5-10的比例加入氰基硼氢化钠进行还原胺反应18-48小时，使活化流脑多糖的醛基和CRM197表面赖氨酸上的氨基产生联接；

（3）加入硼氢化钠封闭活化流脑多糖上未反应的醛基；通过硫铵沉淀或者疏水柱层析的方法去除未与载体蛋白CRM197产生反应的游离流脑多糖，得到纯化的流脑多糖-蛋白质缀合疫苗；所述流脑多糖血清型为W-135和Y至少一种，所述流脑多糖为奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖的简称。

5.根据权利要求1，2或3所述的疫苗，其特征是还包括佐剂。

6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征是所述佐剂选自铝佐剂、弗氏佐剂、单磷酰脂A、CpG、QS-21、霍乱毒素或甲酰甲硫氨酰肽。

7.根据权利要求6所述的疫苗，其特征是所述铝佐剂为磷酸铝或氢氧化铝。

8.根据权利要求1，2或3所述的疫苗，其特征是还包含药学可接受的防腐剂。

9.根据权利要求8所述的疫苗，其特征是所述防腐剂选自苄醇、对羟苯甲酸酯、硫柳汞、氯代丁醇或苯扎氯铵。