[发明专利]DC-CIK细胞治疗组合物

权利要求书

1.一种细胞治疗组合物，包括治疗有效量的树突状细胞（DC）和CIK细胞。

2.权利要求1所述的细胞治疗组合物，其中所述DC和CIK细胞均来源于脐带血单个核细胞。

3.权利要求2所述的细胞治疗组合物，其中DC和CIK细胞分别从同一份脐带血单个核细胞的贴壁细胞和悬浮细胞培养得到。

4.权利要求1所述的细胞治疗组合物，其通过以下步骤制备得到：

（1）将脐带血单个核细胞用含有脐带血血浆的培养基贴壁培养过夜后，吸出悬浮细胞，向贴壁细胞中加入含有rhGM-CSF、rhIL-4、SCF和Flt3-L的上述培养基，继续培养；隔天半量换液，并补加rhGM-CSF和rhIL-4以保持培养基中其浓度不变；于培养的第5天加入肿瘤特异性抗原刺激，第6天加入rhTNF-α，再继续培养2-3天；

（2）向步骤（1）中吸出的悬浮细胞用含有脐带血血浆的培养基悬浮后加入rhIFN-γ，培养24h后，转入细胞培养瓶中，并加入rhIL-2、rhIL-1α、SCF和Flt3-L，继续培养10d；隔天半量换液，并补加rhIL-2以保持培养基中其浓度不变；

（3）将步骤（1）得到的DC与步骤（2）得到的CIK细胞混合，混合后培养条件不变，继续培养3-7天获得成熟的DC-CIK细胞；共培养过程中隔天半量换液，并补加rhIL-2以保持培养基中其浓度不变。

5.权利要求4所述的细胞治疗组合物，其中培养DC和CIK细胞所用的培养基选自完全RPMI-1640培养基、GT-T551培养基或AIM-V培养基。

6.权利要求5所述的细胞治疗组合物，其中，培养DC和CIK细胞所用的培养基为GT-T551培养基。

7.权利要求4所述的细胞治疗组合物，其中，培养DC和CIK细胞所用的培养基中含0.3-10%脐带血血浆。

8.权利要求7所述的细胞治疗组合物，其中，所述培养基中含0.6%脐带血血浆。

9.权利要求3-8任一项所述的细胞治疗组合物，其中，所述脐带血血浆为自体脐带血血浆。

10.权利要求4所述的细胞治疗组合物，其中，所述肿瘤特异性抗原为乳腺癌细胞系ZR-751提取的抗原蛋白。

11.权利要求4所述的细胞治疗组合物，其中，加入的细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4、SCF、Flt3-L、rhTNF-α、rhIFN-γ、rhIL-2和rhIL-1α的终浓度分别为30ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、3ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、50ng/mL和5ng/mL，肿瘤特异性抗原的终浓度为5μg/mL。

12.一种细胞治疗试剂盒，包含权利要求1-11任一项所述细胞治疗组合物。

13.权利要求1所述细胞治疗组合物的制备方法，包括下列步骤：

（1）将脐带血单个核细胞用含有脐带血血浆的培养基贴壁培养过夜后，吸出悬浮细胞，向贴壁细胞中加入含有rhGM-CSF、rhIL-4、SCF和Flt3-L的上述培养基，继续培养；隔天半量换液，并补加rhGM-CSF和rhIL-4以保持培养基中其浓度不变；于培养的第5天加入肿瘤特异性抗原刺激，第6天加入rhTNF-α，再继续培养2-3天；

（2）将步骤（1）中吸出的悬浮细胞用含有脐带血血浆的培养基悬浮后加入rhIFN-γ，培养24h后，转入细胞培养瓶中，并加入rhIL-2、rhIL-1α、SCF和Flt3-L，继续培养10天；隔天半量换液，并补加rhIL-2以保持培养基中其浓度不变；

（3）将步骤（1）得到的DC与步骤（2）得到的CIK细胞混合，混合后培养条件不变，继续培养3-7天获得成熟的DC-CIK细胞；共培养过程中隔天半量换液，并补加rhIL-2以保持培养基中其浓度不变。

14.权利要求13所述的制备方法，其中培养DC和CIK细胞所用的培养基选自RPMI-1640培养基、GT-T551培养基或AIM-V培养基。

15.权利要求14所述的制备方法，其中，培养DC和CIK细胞所用的培养基为GT-T551培养基。