[发明专利]一种促红细胞生成素模拟肽与人血清白蛋白的融合蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种促红细胞生成素模拟肽EMP与人血清白蛋白HSA的融合蛋白，其特征在于，包含1个人血清白蛋白HSA和1个由两个头尾串联的促红细胞生成素模拟肽EMP组成的EMP二联体（dEMP）。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述促红细胞生成素模拟肽EMP的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述人血清白蛋白HSA的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述人血清白蛋白HSA位于融合蛋白的N-末端，所述EMP二联体位于融合蛋白的C-末端，在人血清白蛋白HSA与EMP二联体之间以及两个EMP之间均设有连接肽，所述融合蛋白用结构式表示为HSA-dEMP，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述EMP二联体位于融合蛋白的N-末端，所述人血清白蛋白HSA位于融合蛋白的C-末端，在人血清白蛋白HSA与EMP二联体之间以及两个EMP之间均设有连接肽，所述融合蛋白用结构式表示为 dEMP-HSA，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

6.根据权利要求4或5中所述的融合蛋白，其特征在于，所述人血清白蛋白HSA与EMP二联体之间以及两个EMP之间的连接肽均由1-30个氨基酸残基组成。

7.权利要求1所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，有以下步骤：

1）获取编码EMP二联体和连接肽的基因序列，通过限制性内切酶酶切、连接并转化大肠杆菌，将该基因序列克隆至载体pUC57质粒中，获得质粒 pUC57/dEMP；

2）以含有HSA的pUC57/HSA质粒 的DNA为模版， 通过PCR扩增获得两端带有合适限制性内切酶识别位点的HSA 的cDNA 片段；

3）通过限制性内切酶酶切、连接并转化大肠杆菌，将编码HSA的cDNA 片段插入含有EMP二联体的基因的质粒 pUC57/dEMP中，获得含编码HSA与EMP二联体的融合蛋白的基因的质粒pUC57/HSA-dEMP；

4）通过限制性内切酶酶切、连接并转化大肠杆菌，将编码HSA与EMP二联体的融合蛋白的基因从质粒 pUC57/HSA-dEMP亚克隆至表达载体质粒 pPICZα中，获得含编码HSA与EMP二联体的融合蛋白的基因的重组表达质粒 pPICZα/HSA-dEMP；

5）将步骤4）所述的重组表达质粒 pPICZα/HSA-dEMP转化感受态细胞，再转化到宿主表达系统进行表达，即得所述融合蛋白。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤5）所述宿主是酵母。

9.一种含有权利要求1所述的融合蛋白的编码基因的重组表达载体。

10.一种含有权利要求9所述的重组表达载体的宿主表达系统。

11.权利要求1所述的融合蛋白在制备治疗因慢性肾功能衰竭、肿瘤化疗及失血所导致贫血的药物中的应用。