[发明专利]微拟球藻培养基配方及三级培养方法

说明书

技术领域

本发明属于海洋微藻养殖领域，尤其涉及一种微拟球藻培养基配方及三级培养方法。

背景技术

微拟球藻(Nannochloropsis oculata)又称微绿球藻，是一种广泛分布的海水藻类，直径为2-4微米，细胞球形，淡绿色，富含不饱和脂肪酸及其它营养元素，其中EPA含量占脂肪酸总量的30％。EPA能降低胆固醇和甘油三酯的含量，促进体内饱和脂肪酸代谢，从而降低血液粘稠度，增进血液循环，提高组织供氧而消除疲劳，并防止脂肪在血管壁的沉积，预防动脉粥样硬化的形成和发展、预防脑血栓、脑溢血、高血压等心脑血管疾病。EPA在减轻炎症方面也起着重要的作用。另外，微拟球藻油脂含量占干重的68％以上，是提炼生物柴油的理想微藻。

目前，微拟球藻规模化培养存在的主要问题是生长缓慢，生物量低，易污染，特别是梅雨季节，不利于大规模培养。以前使用的微拟球藻培养基没有加入碳酸氢钠，但我的实验表明，微拟球藻除了能利用空气中游离的CO2，还能有效地利用培养液中的HCO3-作为碳源。大量实验表明：添加0.5g/L的碳酸氢钠能能很好地促进微拟球藻的生长。另外，我还在培养基中补充了柠檬酸铁、维生素H、赤霉素和人尿，能将产量提高54％。

总之，使用优化培养基并采用三级培养微拟球藻方法具有生长速度快、产量高、成本低、不易污染的优势。

发明内容

为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种微拟球藻配方及三级培养方法，具体技术方案如下：

一种微拟球藻培养基，配方如下：NaNO₃ 7.5×10^-2g，KH₂PO₄ 1×10^-2g，NaHCO₃ 5×10^-1g，柠檬酸铁(FeC₆H₅O₇.5H₂O)2×10^-4g，VB₁₂ 5×10^-7g，VB₁ 1×10^-4g，VH 5×10^-7g，九二0植物生长刺激素(即赤霉素)5国际单位，人尿2mL，消毒海水1000mL。

优选地，还包括微量元素0.55～2.25ml/L，所述微量元素配方为：磷酸二氢钠32～40g/L、硫酸铜1.2～3.2g/L、硫酸锌4.2～6.2g/L、氯化钴4～6g/L、氯化锰30～45g/L加水定容至1L。

优选地，所述微量元素溶液中加入120～140g/L的磷酸二氢钠溶液。

优选地，所述微量元素溶液中加入乙二胺四乙酸二钠3～10g/L。

应用本发明所提供的培养基对微拟球藻进行三级培养，包括如下步骤：1)一级培养容器为5000mL三角烧瓶，烧瓶用洗液洗涤、晾干、120℃恒温消毒；培养用的海水比重1.015～1.018，盐度30～32，经过经脱脂棉过滤、煮沸、冷却后加入营养盐；室内培养，室温20-26℃，室内自然光+辅助日光灯管光源照射，光强3000-10000Lx，光暗周期＝14L:10D，指数增长期藻种接种，接种密度300-350×10⁴cell/mL，不充气。培养期间每天摇瓶6次。密度达3000×10⁴cell/mL，即可转入二级培养。2)二级培养容器为50L白塑料桶，白塑料桶刷干净、漂白粉消毒后用消毒水冲干净备用。二级培养用的海水经漂白粉消毒、硫代硫酸钠处理后加入营养盐；将一级培养的藻液按1∶10的比例接种到白桶。室内培养，室温20-26℃，室内自然光+辅助日光灯管光源照射，光强3000-10000Lx，光暗周期＝14L:10D，充气培养，充气量以能将藻细胞冲起悬浮即可。3)三级培养容器为水泥池。面积20-30m²，池深50cm，水深20-30cm，内贴白色瓷砖，三级培养用海水经漂白粉消毒、硫代硫酸钠处理。将二级培养的藻液作藻种转入水泥池培养，室外培养，自然光照射，充气，接种密度200-300×10⁴cell/mL，培养至密度达2000-3000×10⁴cell/mL即可收获。

优选地，包括在步骤2)中充气培养时同时施加臭氧。

优选地，臭氧的浓度为0.5微克/升空气～0.8微克/升空气。

有益效果：