[发明专利]微拟球藻培养基配方及三级培养方法

权利要求书

1.一种微拟球藻培养基，其特征在于该微拟球藻培养基配方如下：NaNO₃ 7.5×10^-2g，KH₂PO₄ 1×10^-2g，NaHCO₃ 5×10^-1g，柠檬酸铁(FeC₆H₅O₇.5H₂O)2×10^-4g，VB₁₂ 5×10^-7g，VB₁ 1×10^-4g，VH 5×10^-7g，九二0植物生长刺激素(赤霉素)5国际单位，人尿2mL，消毒海水1000mL。

2.如权利要求1所述的微拟球藻培养基，其特征在于还包括微量元素0.55～2.25ml/L，所述微量元素配方为：磷酸二氢钠32～40g/L、硫酸铜1.2～3.2g/L、硫酸锌4.2～6.2g/L、氯化钴4～6g/L、氯化锰30～45g/L加水定容至1L。

3.如权利要求2所述的微拟球藻培养基，其特征在于所述微量元素溶液中加入120～140g/L的磷酸二氢钠溶液。

4.如权利要求2所述的微拟球藻培养基，其特征在于所述微量元素溶液中加入乙二胺四乙酸二钠3～10g/L。

5.如权利要求1所述的微拟球藻培养基的三级培养方法，其特征在于包括如下步骤：

1)一级培养容器为5000mL三角烧瓶，烧瓶用洗液洗涤、晾干、120℃恒温消毒；培养用的海水比重1.015～1.018，盐度30～32，经过经脱脂棉过滤、煮沸、冷却后加入营养盐；室内培养，室温20-26℃，室内自然光+辅助日光灯管光源照射，光强3000-10000Lx，光暗周期＝14L:10D，指数增长期藻种接种，接种密度300-350×10⁴cell/mL，不充气。培养期间每天摇动6次，密度达3000×10⁴cell/mL，即转入二级培养。

2)二级培养容器为50L白塑料桶，白塑料桶刷干净、漂白粉消毒后用消毒水冲干净备用。二级培养用的海水经漂白粉消毒、硫代硫酸钠处理后加入营养盐；将一级培养的藻液按1∶10的比例接种到白桶。室内培养，室温20-26℃，室内自然光+辅助日光灯管光源照射，光强3000-10000Lx，光暗周期＝14L:10D，充气培养，充气量以能将藻细胞冲起悬浮即可。

3)三级培养容器为水泥池。面积20-30m²，池深50cm，水深20-30cm，内贴白色瓷砖，三级培养用水经漂白粉消毒、硫代硫酸钠处理。将二级培养的藻液作藻种转入水泥池培养，室外培养，自然光照射，充气，接种密度200-300×10⁴cell/mL，培养至密度达2000-3000×10⁴cell/mL即可收获。

6.如权利要求5所述的微拟球藻培养基的三级培养方法，其特征在于包括在步骤2)中充气培养时同时施加臭氧。

7.如权利要求5-6所述的微拟球藻培养基的三级培养方法，其特征在于臭氧的浓度为0.5微克/升空气～0.8微克/升空气。