[发明专利]一种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法

说明书

技术领域

本发明属于药物化学领域，更具体涉及一种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法。

背景技术

手性对映体的存在是自然界的一种普遍现象，作为生命活动重要基础的生物大分子，如蛋白质、多糖、核酸和酶等，几乎全是手性的，这些小分子在体内往往具有重要生理功能。手性对映体在吸收、分布、代谢与排泄过程中，通过与体内大分子的不同立体结合，产生不同的药理作用和反应（J. Ruta, C. Ravelet, I. Baussanne, J. L. Décout and E. Peyrin, Analytical Chemistry, 2007, 79, 4716-4719；C. Han and H. Li, Small, 2008, 4, 1344-1350.）。因此，手性对映体的分离、分析，对研究生命科学、药物化学以及人类健康都具有十分重要的意义。在药物化学领域尤为突出。在临床治疗方面，服用对映体纯的手性药物不仅可以排除由于无效(不良)对映体所引起的毒副作用，还能减少药剂量和人体对无效对映体的代谢负担，对药物动力学及剂量有更好的控制，提高药物的专一性。因而具有十分广阔的市场前景和巨大的经济价值。目前世界上使用的药物总数约为1900种手性药物占50%以上，在临床常用的200种药物中，手性药物多达114种。

核酸适体（aptamer）指的是经体外筛选技术SELEX(指数富集配体系统进化)筛选出的能特异结合蛋白质或其他小分子物质的寡聚核苷酸片段。适配体具有目标物范围广，高亲和力，与目标物的结合具有很高的特异性，稳定性高等特点，成为最近出现在手性分离领域的新星，如其做为手性添加剂在毛细管电泳中分离精氨酸（Ruta ,J., et al.  Anal. Chem.., 2006, 78, 3032）, 以及作为手性固定相在高效液相色谱中分离组氨酸（Ruta ,J., et al.  Journal of Chromatography B, 2007, 845, 186）等,但上述方法一般需要复杂的分离仪器和繁琐复杂的制柱技术，而且无法做到较大量的分离。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法，本发明以核酸适体修饰的纳米金为手性选择试剂，利用适体高选择性和高亲和性的特点，以及在高温下变性，在缓慢恢复到室温又恢复其三级结构的特性，来进行手性化合物的手性拆分；只需简单的离心机，就可以达到分离的目的。此外，由于适体的目标物很广泛，该方法具有很强的通用性，可操作性，实用价值高。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法包括以下步骤：

（1）将巯基修饰的核酸适体修饰在纳米金粒子表面；

（2）向步骤（1）的纳米金溶液中加入待分离的手性化合物，室温孵育后离心，所得上清液即为其中一种构型的手性化合物；

（3）将离心管底部的纳米金用二次水重新分散，在95℃下使适体变性并离心，所得上清液为另一种构型的手性化合物。

所述步骤(1)中的核酸适体为能够特异识别目标化合物中一种异构体的功能核酸。

所述步骤(1)中的纳米金的粒径为10-100 nm。

所述步骤(2)中的离心速度为3000-10000rpm，离心时间为5-30分钟。

本发明的有益效果：本发明利用了适体在高温下变性,在常温下复性的优点,设计了一种可以循环利用的手性选择试剂。纳米金粒子大的比表面积保证了最大数量的结合位点,而适体上修饰的巯基可以很容易地与纳米金粒子相结合,在适合的缓冲液中形成三级结构,与目标物作用,通过简单的离心分离,与适体相互作用的一种构型的异构体就会与纳米金粒子一起沉淀,而另一种构型的纳米粒子还在上清液中。由于适体在高温下变性，与适体相互作用的那种构型的手性目标物就会释放出来，从而达到了手性分离的目的。由于适体在缓慢恢复到室温的时候又恢复了和目标物相互作用的能力，使得此手性选择试剂可以循环利用。

该方法改变了原先分离大部分都是用色谱法分离的现状,实现了对目标手性化合物的简单分离,从而简化了分离步骤，扩大了分离范围。同时,由于该方法可实现在最佳的条件下手性选择试剂的重复利用,因此该方法具有很高的经济价值。

附图说明

图1是本发明的分离过程示意图。

具体实施方式

以下实施例结合附图来叙述本发明的具体工作原理：