[发明专利]一种灵芝醇提物的质量控制方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种灵芝醇提物的质量控制方法。 

背景技术

    灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss．ex Fr．)Karst．或紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang或松杉灵芝Ganoderma  tsugae  Murr.的干燥子实体，具有补气安神、止咳平喘等功效。研究表明，灵芝中主要含有多糖、三萜、核苷、生物碱、黄酮、氨基酸及微量元素等多种化学成分，具有抗肿瘤、免疫调节、护肝、抗氧化、降压、降血脂等功能。目前，药理活性研究主要集中在灵芝多糖和灵芝三萜类成分，特别是对灵芝三萜药理研究报告较多，因此，三萜类成分作为灵芝的主要功效成分之一，很有必要对其含量进行测定。目前，灵芝醇提物的质量控制大多用紫外分光光度法测定总三萜含量，该方法常出现假阳性，专属性差。高效液相色谱法特异性强，可达到鉴别和质量控制的目的。本发明采用高效液相色谱法分离并建立了灵芝醇提物中灵芝酸A、B、C₂的含量测定方法，并以灵芝酸A、B、C₂的总量作为质控指标，为灵芝醇提物的质量控制提供了参考依据。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵芝醇提物的质量控制方法，将灵芝醇提物中的灵芝酸A、B、C₂含量之和作为质量控制指标。赤芝、紫芝及松杉灵芝均含有相对含量较高的特征成分灵芝酸A、B、C₂。对比目前常用的比色法测定总三萜含量的方法，特异性强，可达到鉴别和质量控制的目的。 

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 

一种灵芝醇提物的质量控制方法，其特征在于：将灵芝醇提物中的灵芝酸A、B、C₂含量之和作为质量控制指标；

灵芝醇提物以甲醇作为溶剂，超声提取，灵芝酸A、灵芝酸B经高效液相色谱柱C₈分离；灵芝酸C₂经高效液相色谱柱C₁₈分离，分别用二极管阵列检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，峰面积外标法定量，分别测定试样中灵芝酸A、B和灵芝酸C₂的含量，并计算其总量。

灵芝酸A、B测定的色谱条件：以辛烷基键合硅胶为键合相（色谱柱：Agilent Zorbax-SB C₈，150 mm × 4.6 mm, 3.5 μm或同规格色谱柱），乙腈为流动相A，体积分数为0.1%的醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为257 nm；柱温为22 ℃；流速为1.0 ml/min；理论板数按灵芝酸A计算不低于5000； 

对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的灵芝酸A、B对照品，加甲醇制成每1ml含20 μg灵芝酸A和每1ml含15 μg灵芝酸B的混标溶液；

供试品溶液的制备：取灵芝醇提物0.2g，置100ml容量瓶中，加甲醇超声处理25min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 20 μl，注入液相色谱仪，测定，用主峰保留时间定性，峰面积定量。

灵芝酸C₂测定的色谱条件：以十八烷基键合硅胶为键合相(色谱柱：Agilent Zorbax-SB C₁₈，250 mm × 4.6 mm，5 μm或同规格色谱柱），乙腈为流动相A，体积分数为0.1%的醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为257 nm；柱温为20 ℃；流速为1.0 ml/min；理论板数按灵芝酸C₂计算不低于5000； 

对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的灵芝酸C₂对照品，加甲醇制成每1ml含10μg灵芝酸C₂ 的对照品溶液；

供试品溶液的制备：取灵芝醇提物0.2g，置100ml容量瓶中，加甲醇超声处理25min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 20 μl，注入液相色谱仪，测定，用主峰保留时间定性，峰面积定量。