[发明专利]一种含G2A基因的重组质粒及构建方法无效
| 申请号： | 201210197246.3 | 申请日： | 2012-06-15 |
| 公开（公告）号： | CN102703485A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 阿拉坦高勒;杨德志;黄旭东;冯文利;木其日 | 申请（专利权）人： | 阿拉坦高勒 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/12;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京鼎佳达知识产权代理事务所(普通合伙) 11348 | 代理人： | 蒋常雪 |
| 地址： | 010021 内蒙古自治区呼和浩特*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 g2a 基因 重组 质粒 构建 方法 | ||
1.一种含G2A基因的重组质粒，其特征在于，包括载体片段pEGFP-N3和基因片段G2A。
2.如权利要求1所述的重组质粒，所述基因片段G2A是从人脐静脉内皮细胞提取总RNA，反转录获得的cDNA中PCR扩增得到的。
3.如权利要求1所述的重组质粒，所述载体片段pEGFP-N3来自质粒pEGFP-N3。
4.如权利要求1-3所述的任一含G2A基因的重组质粒的构建方法，其特征在于包括如下步骤：
1）PCR扩增获得G2A基因；
2）将含有pEGFP-N3片段的载体与步骤1）获得的含G2A基因的PCR产物酶切后连接；
3）将步骤2）获得的连接产物转染293T细胞；
4）检测外源基因在293T细胞中的表达。
5.如权利要求4所述的含G2A基因的重组质粒的构建方法，其特征在于步骤1）包含通过 PCR 从人脐静脉内皮细胞提取总 RNA，反转录获得的 cDNA 中 扩增得到G2A 基因。
6.如权利要求5所述的含G2A基因的重组质粒的构建方法，其特征在于步骤1）中的PCR扩增中使用PCR引物5'-AAGCTTATGTGCCCAATGCTACTGAA-3'和5'-GGATCCGCAGGACTCCTCAATCAGCC-3'。
7.如权利要求4所述的含G2A基因的重组质粒的构建方法，其特征在于步骤2）中所述含有pEGFP-N3的载体为质粒pEGFP-N3。
8.如权利要求4所述的含G2A基因的重组质粒的构建方法，其特征在于步骤2）中采用HindⅢ和BamHⅠ酶对含有pEGFP-N3片段的载体与步骤1）获得的含G2A的基因的PCR产物进行酶切。
9.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于步骤4）中所述检测方法为Real time PCR法。
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