[发明专利]原发性高血压基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种原发性高血压的基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估人群原发性高血压发生的风险级别，并且指导原发性高血压高危人群提早预防和治疗。 

背景技术

原发性高血压是危害人类生命健康的世界性公共卫生问题之一。作为主要危险因素，它所导致的脑卒中、冠心病、心功能不全、肾脏疾病等，在总患病率和总死亡率中所占的比例日趋增高，已上升为各类疾病死亡率的首位，给家庭和社会带来了很大的经济负担。预计到2020 年,冠心病和脑卒中将成为全球排名第一位和第四位的疾病,因此，深入探索高血压病因,开展高血压易感基因的研究是十分重要的现实课题。

人血管紧张素转化酶（ACE）基因全长21kb，包含26个外显子，在16号内含子存在插入（I）或缺失（D）多态性, 血清ACE活性高低不同在不同ACE基因型人群中依次为DD>DI>II型。血中的ACE影响着血管紧张素I（Ang I）向活性较强的血管紧张素II（Ang II）转换，其结果不但影响内环境的稳定，而且对于血管弹性的维持也具有重要作用。ACE基因还能灭活缓激肽、速激肽等，而这两种多肽可以降低血压。

AGTR1基因能够介导血管收缩、促进血管平滑肌细胞增殖，使血管变厚。当A1166C位点为AC基因型时，AGTR1蛋白表达量增加，血管壁张力增加、血管壁厚度增加，增加高血压的发病风险。

内源性一氧化氮合酶（eNOS3/NOS3）是一氧化氮（NO）合成的限速酶，NO是外周与中枢神经系统的神经递质，在心血管系统具有维持血管张力，调节血压等功能。一旦eNOS3基因突变，NO生成不足，即可引起高血压。

血管紧张素原( AGT) 基因定位于1q42 -43，是目前最有代表性、研究最多的血压调节候选基因。能够介导血管收缩、促进血管平滑肌细胞增殖，使血管变厚。1992 年Jeunemaitre 等使用原发性高血压家系中同胞患者配对的方法( sib - pair)，最先证实AGT基因M235T多态性与高血压相关基因连锁。

ADRB2基因通过改变血管紧张性，调节肾素释放，影响水盐代谢等途径调节血压。当Arg16Gly位点为AG基因型时，ADRB2蛋白活性降低，血管扩张反应减弱，导致血管阻力增加，增加高血压的发病风险。

血中醛固酮水平与醛固酮合成酶活性密切相关，该酶是体内合成醛固酮的重要催化酶。其基因CYP11B2定位于8号染色体上（8q22），总长约7kb，含8个内含子和9个外显子。常见的变异位于启动子区域-344处，发生C与T的交换。研究表明，CYP11B2基因C-334T多态性与血中醛固酮水平，高血压病等密切相关。

因此，建立简单、快速的原发性高血压易感基因无创检测方法，能够检测出人群原发性高血压疾病发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患原发性高血压的高危人群，有针对性的进行指导和预防，对于降低疾病发生、保障人群的安全健康具有非常重要的意义。

发明内容

基于ACE基因上I/D、AGTR1基因上A1166C、NOS3基因上G894T、AGT基因上M235T、ADRB2基因上Arg16Gly以及CYP11B2基因上C-344T的6个单核苷酸多态性位点基因型可用来评估原发性高血压发病风险级别，本发明提供一种原发性高血压基因无创检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测ACE基因上I/D、AGTR1基因上A1166C、NOS3基因上G894T、AGT基因上M235T、ADRB2基因上Arg16Gly以及CYP11B2基因上C-344T的6个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）；

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液 2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对（每条引物各0.25ul）；ddH2O 19.175ul；

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶 0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O 3.875ul；