[发明专利]山莓叶中一种二萜化合物、制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及山莓叶中一种二萜化合物、分离纯化制备方法及其在制备抗肿瘤药物方面的用途。

背景技术

山莓(Rubus corchorifolius L.f)属蔷薇科悬钩子属中一种落叶灌木。多生长于向阳山坡、溪边、山谷、荒地和灌丛中，海拔300m～1500m。除东北、内蒙古、青海、新疆、西藏外，全国均有分布。福建全省各地均有山莓分布，野生资源蕴藏量相当大。我国利用山莓的历史悠久，在古书《本草拾遗》、《本草纲目》、《名医别录》、《食疗本草》中就有山莓药用价值的详细记载，其药用已有上千年历史。山莓果、根及叶均可入药。

二萜化合物的抗肿瘤活性是十分显著的。L.Z.Li等(2010)从芫花中得到一个新的二萜化合物并研究得出其对人类早期的HL-60肿瘤细胞具有抑制作用，其IC50值为11.74μM。Li FS等(2010)从乳香中得到七个大环二萜类化合物，这七种化合物均对Bel-7402，Hela和SW-480肿瘤细胞有抑制作用。盘永才等(2006)从柳珊瑚中分离得到的三种二萜中，二萜T-7对肿瘤细胞KB，P388和L1210等显示出很强的抑制活性，ED50依次为2.80、0.31、0.22μg/mL；二萜T-8、T-9，也有很强的抗肿瘤活性；张敏等人(张敏，2007，药学学报；张敏，2011，HELVETICA CHIMICA ACTA)从山莓叶中分离得到了四个新的二萜化合物：3α,16α,17,19-对映-贝壳杉烷-四醇和2羰基-16α-羟基-对映-贝壳杉烷-17-β-D-葡糖苷。3β,1 6α,17,19-四羟基-対映贝壳杉-19-乙酸酯，3β,1 6α,17,19-四羟基-対映贝壳杉-19-乙酸酯-17-氧-β-D-葡萄糖苷。陈雪香等人(陈雪香，2010，HELVETICA CHIMICA ACTA)从山莓叶中分离鉴定出三个新化合物化合物：分别为9β,16α,17三羟基-对映贝壳杉-2酮(9β,16α,17-trihydroxy-ent-kaur-2-one)，16α,17，19三羟基-对映贝壳杉-2酮(16α,17,19-trihydroxyl-ent-kaur-2-one)，2β，3α，16α，17-四羟基-对映-贝壳杉醇(2β，3α，16α，17-tetrahydroxyl-ent-kauranol)，且均具有抗肿瘤的作用。

发明内容

本发明的目的是提供从山莓中分离出的一个二萜化合物，MTT肿瘤活性实验证明该化合物具有抗肿瘤作用。

本发明所提供的一个新二萜化合物是从山莓中经过反复硅胶柱层析、薄层层析和结晶的方法所得，化学名称分别为：16α、17、18-三羟基-对映-贝壳杉烷-18-O-β-D-葡萄糖苷。其结构式如下：

上述化合物由包括以下步骤的制备方法所得：

(1)称取粉碎的山莓叶，加入体积分数浓度60-80％的乙醇水溶液，料液重量体积比为1g：10ml，搅匀，先超声提取30min，然后于室温下浸提48h，过滤，滤渣再重复提取一次，合并滤液，浓缩冷冻干备用；

(2)将浸膏液用依次用石油醚，氯仿、乙酸乙酯、正丁醇反复多次萃取，将萃取液分别浓缩，冷冻干燥，分别得石油醚，氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物；

(3)将乙酸乙酯萃取物进行中压硅胶柱色谱分离，用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱，再用乙酸乙酯与甲醇进行梯度洗脱，洗脱的流速为15mL/min，同时每管收集的流份量为20mL，收集洗脱液。

(4)将洗脱液进行压硅胶柱层析分离纯化，用氯仿与甲醇进行梯度洗脱，收集的样品点板合并样品，将样品进行结晶，得化合物和母液。

步骤(3)中，用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱时，首先用石油醚洗脱，然后用石油醚和乙酸乙酯混合液洗脱，石油醚和乙酸乙酯的重量配比为20:80。

用乙酸乙酯与甲醇进行梯度洗脱时，乙酸乙酯与甲醇的重量配比分别为100:0，40:1，10:l，0:1。

步骤(4)中，用氯仿与甲醇进行梯度洗脱时，氯仿和甲醇的重量配比分别为25:1，15:1，10:1，5:1。

实验证明，上述化合物对肝癌细胞具有直接的抑制作用，可以用于制备抗肿瘤药物。

附图说明

图1为二萜化合物对HepG2肝癌细胞生长的抑制作用对比试验结果图。

具体实施方式

从山莓中分离出的一种新化合物，化学名称分别为：16α、17、18-三羟基-对映-贝壳杉烷-18-O-β-D-葡萄糖苷，结构式为：