[发明专利]经修饰的树突状细胞及包含该树突状细胞的疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术及医学领域，具体地，本发明涉及一种经修饰的树突状细胞及包含该树突状细胞的疫苗。 

背景技术

树突状细胞（dendritic cell，DC）是目前已知抗原递呈能力最强的抗原提呈细胞，引起当前肿瘤免疫治疗的密切关注。DC能摄取、加工抗原，表达高水平MHC分子、共刺激分子、细胞粘附分子ICAM-1、ICAM-3以及淋巴细胞功能相关抗原-3(1ymphocyte function associated antigen LFA-3)等有助于抗原提呈的分子，并分泌高水平Thl型细胞因子IL-12，有效地向T淋巴细胞提呈抗原，启动患者自身特异性杀瘤免疫反应。但大量的实验表明肿瘤患者体内的DC处于一种“无能状态”，在体内对肿瘤抗原的提呈作用较弱。DC与肿瘤的发生发展及预后关系密切，肿瘤的发生可能与肿瘤浸润性DC或宿主DC功能缺陷有关，此情况下它们无法有效地提呈肿瘤抗原，激活T细胞识别并杀伤肿瘤细胞；产生此情况的机制为肿瘤细胞释放的可溶性因子作用于DC使其表面分子的表达发生变化，引起肿瘤的免疫逃逸。大多数研究表明体内肿瘤抑制了DC的成熟而非直接抑制DC的功能。Lissoni等在对40例癌症病人的临床研究中发现癌症患者外周血中成熟和不成熟DC百分比均明显低于对照组，且有转移灶者显著低于无转移者，说明DC的缺乏在诱发肿瘤的免疫抑制中起重要作用。故体外诱导功能性DC用于主动免疫治疗有重要的临床应用价值。 

不同类型的肿瘤抗原刺激DC所诱导的抗肿瘤效应强弱不等，有的甚至无效，因此，寻找合适的肿瘤抗原刺激DC尤为重要。目前主要有以下两种肿瘤抗原刺激DC的方式： 

（1）全细胞性肿瘤抗原致敏方式：由于目前大多数肿瘤特异性抗原类型尚未明确鉴定，因而可对DC给予全细胞性肿瘤抗原刺激，由DC去选择肿瘤抗原并对其进行加工、提呈。目前制备全细胞性肿瘤抗原可采用快冻慢融法、照射法、化学药物处理法、加热法等。 

（2）肿瘤相关抗原（Tumor Associated Antigen,TAA）基因转染方式：大多数MHC限制性肿瘤抗原肽的半衰期仅2-10h，若要诱导出高水平持久的抗肿瘤免疫效应，则要反复多次回输负载肿瘤抗原肽的DC。若将TAA基因以DNA或RNA的形式导入DC，使DC持续以合适的方式将肿瘤抗原的多个表位与MHC结合，表达于DC的表面，能更有效地激活T细胞产生针对TAA的强烈的、特异性的抗肿瘤免疫反应。以TAA基因转染DC制成DC疫苗进行肿瘤基因免疫治疗已成为当前的研究热点。 

在基因运载方面，病毒载体以其高效和良好的靶向性在基因治疗中得到广泛的应用。目前用于基因修饰的病毒载体主要有：逆转录病毒（RV）、腺病毒（AV）、腺相关病毒（AAV）和慢病毒（LV）。它们各自的优缺点简述于表1中。 

表1 

由表1可知，慢病毒载体与其它病毒载体相比有着巨大的优越性，且有研究表明，慢病毒感染后的DC细胞的抗原提呈能力与正常DC细胞相比没有明显差异，因此慢病毒可作为基因修饰DC的良好载体，介导特异性的抗肿瘤免疫应答。 

视网膜母细胞瘤（retinoblastoma，RB），发生于视网膜核层，是儿童眼部最常见的原发性恶性肿瘤，近年来发病率有所上升。目前针对RB的研究显示，原致癌基因SYK（spleen tyrosine kinase）在RB细胞中表达增强，SYK的小分子抑制剂能诱导RB细胞死亡（Zhang等，Nature，DOI:10.1038/nature10733（2012））。而SYK基因在肿瘤疫苗中的应用却未见报道。 

发明内容

针对目前视网膜母细胞瘤高发的情况，本发明提供一种SYK基因修饰的DC细胞及包含该DC细胞的疫苗，用于针对视网膜母细胞瘤的主动免疫治疗。 

本发明的目的通过以下技术手段得以实现： 

一种经修饰的树突状细胞，包含利用病毒载体转染至其中的SYK基因。 

一种用于肿瘤的预防和主动免疫治疗的树突状细胞疫苗，其活性成分为本发明的经修饰的树突状细胞。 

本发明的SYK基因修饰的DC疫苗制备工艺简便，所得的慢病毒转染的DC细胞在以下方面：细胞表面CD80、CD83、CD86分子的表达水平，与CIK细胞共培养后得到的LV-DC-CIK细胞中CD3⁺CD56⁺T细胞的百分比及该LV-DC-CIK的杀瘤率，细胞培养上清液中IFN-γ的分泌量，均显著高于对照组，因此本发明的DC疫苗有良好的主动免疫治疗效果。 

附图说明