[发明专利]荧光微球标记物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种荧光微球标记物及其制备方法。

背景技术

常用荧光标记物如异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明-6-G(R-6-G)等，荧光寿命较短，难以克服背景荧光的干扰，因此检测灵敏度较低。利用具有长荧光寿命的稀土络合物作为标记物，采用时间分辨检测技术，可以有效克服背景荧光的干扰，可使灵敏度有极大的提高。这种技术被称为时间分辨荧光检测技术，已成为目前生物医学研究和临床生化检测中的常见技术之一。

常用稀土离子主要有：铕、钐、镝和铽，它们能与某些特定的配合物形成具有强烈荧光的络合物。稀土荧光络合物具有以下优点：(1)长荧光寿命。一般荧光络合物及背景荧光的寿命约为1～10纳秒，而稀土荧光络合物的荧光寿命一般为10～1000微秒，两者相差5～6个数量级。因此采用时间分辨荧光检测技术，可以有效克服非特异性的背景荧光的干扰，极大地提高测量灵敏度。(2)较宽的激发光谱带。这有利于增加激发能，提高标记物的比活性。(3)较窄的发射谱带。半峰宽小于15纳米，有利于提高分辨率。(4)较大的Stokes位移。稀土络合物的最大激发光波长通常在300～380纳米的紫外区，最大发射波长在500纳米以上，Stokes位移达250～350纳米，可有效排除各种背景荧光的干扰，增强检测的特异性和灵敏度。(5)激发波长具有配体的特性，即随配体的变化而变化，发射波长则具有稀土离子的性质，即不随配体的变化而变化。

稀土离子或稀土配合物和二氧化硅掺杂的发光材料已有不少报道，Cannasa(Cannasa.C，etal，Mat.Res.Soc.Symp.Proc.676(Y3)18.1-18.6，2001)描述了一直用溶胶-凝胶法制备直接掺杂Eu³⁺的Y2O3-SiO2纳米发光材料。Moran等(C.E.Moranetal，Langmuir2001，17，8376-8379)合成了一直掺入Pr³⁺和Er³⁺的硅纳米颗粒。程艳玲等(程艳玲等，应用化学2008，25(10)，1217-1220)以聚乙烯吡咯烷酮作稳定剂，将单体苯乙烯通过超声辐照分散聚合制得直径在80nm左右的聚苯乙烯纳米微球。

CN01133257.3号专利公开了一种将二氧化硅、高分子单体和部分稀土荧光络合物混合，先产生凝胶，再进行高分子聚合，可得到块状的发光材料，具有优良的力学性能，可以磨制抛光。但也存在制备方法繁琐，工业化生产难度较大的缺点。

CN01133258号专利公开了一种无溶剂人型高聚物/稀土化合无纳米杂化发光材料的合成方法，采用Sol-Gel反应，将无机组分的前驱体正硅酸乙酯、乙烯基单体和稀土配合物都加入到溶胶体系中，在乙酸的存在下水解缩合，乙酸在此是调节pH值又起到增进两相相溶性的目的。搅拌合成为均相溶胶，然后凝胶化。之后利用热聚合方法引发单体聚合，从而获得有机/无机纳米杂化发光材料。该方法同样存在制备工艺复杂的缺点，且不易控制制备得到的纳米材料的大小及均一度。

CN1631951号专利公开了一种聚合物中空微球的制备方法，该微球通过微乳液聚合方法在无机材料纳米微球的表面化学键接一层聚合物，形成聚合物/无机材料纳米复合核壳结构微球，然后用强酸刻蚀发去掉无机材料获得，其尺寸为微米到纳米级。该方法制备得到的微球尺寸较大，不适合应用于生物医学领域。

现有稀土荧光络合物标记物，稀土离子主要是Eu³⁺、Sm³⁺、Dy³⁺和Tb³⁺同一些有机配合物如β-二酮化合物、邻菲咯啉类化合物、水杨酸类化合物、联吡啶类化合物等所形成络合物，虽然目前已得到不同程度的应用，但是都难以同时满足以下要求：(1)具有强烈的荧光。(2)稳定性好：包括热力学稳定和耐光漂白等。(3)易于与抗体、核酸等生物大分子交联，交联后能同时保持标记物的高荧光强度和被标记物的生物活性。(4)易合成。

发明内容

本发明的目的是提供一种荧光微球标记物，与常规荧光标记物相比，具有更高的荧光强度，更高的稳定性，更易于标记，且制备简单。

本发明的技术方案为提供一种荧光微球标记物，包括载体，所述载体为由苯乙烯单体聚合而成的微球，所述微球上连接有荧光络合物。

优选的，上述方案中所述荧光络合物为稀土荧光络合物。

优选的，上述方案中所述微球化学键合有带有活性基团的有机硅烷。

优选的，上述方案中所述活性基团为氨基、羧基或巯基。