[发明专利]荧光微球标记物及其制备方法

权利要求书

1.一种荧光微球标记物，其特征在于，包括载体，所述载体为由苯乙烯单体聚合而成的微球，所述微球上连接有荧光络合物。

2.如权利要求1所述的荧光微球标记物，其特征在于，所述荧光络合物为稀土荧光络合物。

3.如权利要求2所述的荧光微球标记物，其特征在于，所述微球化学键合有带有活性基团的有机硅烷。

4.如权利要求3所述的荧光微球标记物，其特征在于，所述活性基团为氨基、羧基或巯基。

5.如权利要求3所述的荧光微球标记物，其特征在于，所述的荧光稀土络合物是带有活性基团的稀土配体，所述稀土荧光络合物通过化学键与带有活性基团的有机硅烷的微球连接。

6.根据权利要求1所述的荧光微球标记物，其特征在于，所述荧光络合物为4，7-二氯磺基苯-1，10-菲咯啉-2，9-二羧酸-铕、4，4，-双(1，1，1，2，2，3，3，-七氟-4，6，-己二酮基)氯磺基-邻-三联苯-铕、异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明中的一种或者几种。

7.一种荧光微球标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、制备聚苯乙烯纳米微球，并将其和带有活性基团的有机硅烷化学键合，形成表面带有活性基团的微球；

b、将荧光络合物以化学键合掺杂于上述微球中，得到带有荧光络合物的微球，之后再以带有活性基团的有机硅在微球表面引入活性基团。

8.根据权利要求7所述的荧光微球标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、制备聚苯乙烯纳米微球，并将其和带有活性基团的有机硅烷化学键合，形成表面带有活性基团的微球，具体为：

每100mL乙醇溶液中加入25g聚乙烯吡咯烷酮、0.06g过硫酸钾、10g苯乙烯，所述乙醇溶液中乙醇与水的体积为3:1，将配置好的每100mL乙醇溶液溶解后置于超声波反应器中，通氮气排除体系中的氧气，开启超声波发生器进行聚合反应，得到聚苯乙烯纳米微球分散液，离心搜集聚苯乙烯纳米微球，以5mL无水乙醇悬浮，加入5μL氨基硅烷，搅拌反应1小时，以等体积无水乙醇洗涤后收集；

b、将荧光络合物以化学键合掺杂于上述微球中，得到带有荧光络合物的微球，之后再以带有活性基团的有机硅在微球表面引入活性基团，具体为：

将1mg/mL的BCPDA按等体积加入到氨基化纳米微球悬浮液中，搅拌15min，离心收集，悬浮于50mmol/L的pH=7.8磷酸盐缓冲液中，加入等体积0.1mol/L的EuCl₃溶液，避光搅拌反应10min；离心收集后悬浮于等体积无水乙醇溶液中，加入5μL氨基硅烷，搅拌反应1小时，以等体积无水乙醇洗涤后收集，即得到稀土荧光微球标记物。

9.根据权利要求7所述的荧光微球标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、制备聚苯乙烯纳米微球，并将其和带有活性基团的有机硅烷化学键合，形成表面带有活性基团的微球，具体为：

每100mL乙醇溶液中加入25g聚乙烯吡咯烷酮、0.06g过硫酸钾、10g苯乙烯，所述乙醇溶液中乙醇与水的体积为3:1，将配置好的每100mL乙醇溶液溶解后置于超声波反应器中，通氮气排除体系中的氧气，开启超声波发生器进行聚合反应，得到聚苯乙烯纳米微球分散液，离心搜集聚苯乙烯纳米微球，以5mL无水乙醇悬浮，加入5μL氨基硅烷，搅拌反应1小时，以等体积无水乙醇洗涤后收集；

b、将荧光络合物以化学键合掺杂于上述微球中，得到带有荧光络合物的微球，之后再以带有活性基团的有机硅在微球表面引入活性基团，具体为：

将FITC配制成1mg/mL的乙醇溶液，按等体积加入到氨基化纳米微球悬浮液中，搅拌15min，离心收集，离心收集后悬浮于等体积无水乙醇溶液中，加入5μL氨基硅烷，室温搅拌反应1小时，以等体积无水乙醇洗涤后收集，即得到稳定的FITC荧光微球标记物。