[发明专利]肝癌细胞核酸适配体序列及其用途

说明书

技术领域

本发明属细胞生物技术领域。涉及肝癌细胞核酸适配体序列，具体涉及一种肝癌细胞的核酸适配体的序列及应用。

背景技术

统计显示，我国是肝癌发生的第一大国，其发病率占全球的55％，死亡率占全球45％，并以每年30多万例的速度上升。据报道，肝癌已是全球第六位最常见癌症，是全球第三位癌症致死原因，严重威胁到人类健康。临床治疗方案中，手术虽可根治肝癌，但仅限于少部分患者，对于多数患者，或因病灶较大或因考虑术后复发转移等因素，化疗仍是主要治疗手段，但目前肝癌的化学治疗尚缺少有效的治疗药物，为提高肝癌的化学治疗效果，本领域研究者致力于寻找有效的抗肝癌的药物靶点。

已知核酸适配体(aptamer)是经体外筛选技术筛选出的能特异结合金属离子、多肽、蛋白质乃至整个细胞的寡聚核苷酸(DNA或RNA)片段。它的特异性如同抗体一样，对可结合的配体有严格的识别能力和高度的亲和力。核酸适配体的体外筛选技术被称为指数富集的配体系统进化(Systematic evolution ofligand by exponentialenrichment，SELEX)技术。SELEX技术模拟自然进化过程，对随机寡核苷酸文库施加选择压力(结合靶目标)，淘选与靶目标高度特异结合片段(如图1所示)。

研究显示，核酸适配体相比抗体等多肽类的适配体(peptide aptamer)的优势相当明显，例如：制备简单快捷、化学性质稳定、至今未见报道存在免疫原性或毒性、靶分子范围广、亲和力高、特异性强、易于进行改造修饰等等。

核酸适配体的诸多优势令其在基础研究、临床检测、新药开发等方面有着广泛的用途。在临床检测方面，目前能用抗原抗体反应进行检测的技术几乎都可以用核酸适配体替代，如Archemix公司开发的一种适配体分子传感器——RiboReporter^TM即可以将检测到的蛋白信号直接转化成光信号记录并分析，从而实现了对生物混合液(如血清、细胞提取物)中的大分子蛋白的直接快速检测。在新药开发方面，最典型的例子便是第一个通过美国FDA批准上市的核酸适配体药物Macugen。它是抗血管内皮细胞生长因子(VEGF)的核酸适配体，被用于治疗湿性老年性黄斑变性(wetAMD)。另一个核酸适配体药物的例子是由Aptamera公司研制的AGR0100。临床前试验表明，AGRO100对多种癌细胞均有抑制作用。目前国际上大部分从事核酸适配体研究的科学家和生物技术公司主要针对心血管疾病，而较少见有关针对中国人的常见疾病，如肝炎、肝癌、胃癌等的报道，因此本发明采用核酸适配体应用于上述严重威胁我国人民健康的常见重大疾病，开发针对肝癌细胞的核酸适配体作为特征性标志物，为肝癌的分子诊断和靶向治疗提供有力支持，其将具有重要的临床价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种肝癌细胞的核酸适配体的序列，尤其涉及一种人肝癌细胞株HepG2的核酸适配体中具有特异结合人肝癌细胞株HepG2的序列(本发明中命名为HCCAp2)。

本发明中，所述的肝癌细胞的核酸适配体中含有特异结合HepG2的特征序列，所述的特征序列结构为TTTTTT。

本发明中，所述的肝癌细胞选自人肝癌细胞株HepG27。

本发明的进一步目的是提供所述核酸适配体序列的用途，根据对该序列分析，设计抗肝癌的药物并进一步制备抗肝癌的药物或制品。

本发明的目的通过下述技术方案实现：