[发明专利]检测3-甲基喹噁啉-2-羧酸的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测3-甲基喹噁啉-2-羧酸的试剂盒。

背景技术

3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)是喹乙醇、乙酰甲喹和喹烯酮在动物体内产生的代谢物。通过研究发现喹噁啉类原形药物及代谢物存在着明显的安全性问题，具有明显的致畸、致癌、致突变、光敏和肾上腺皮质损害等毒副作用，严重危害了人和动物的健康。国际上有关喹噁啉类药物的最高残留限量规定非常严格。欧盟规定卡巴氧和喹乙醇以及其代谢产物在动物性食品中不得检出而且规定这两种兽药禁止销售。我国农业部公告第235号规定，喹乙醇最高残留限量为喹乙醇+3-甲基喹噁啉-2-羧酸：4ug/kg(肌肉)，50ug/kg(肝脏)，2mg/kg(饲料)。

目前国内外研究主要有色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和免疫分析技术等。TLC法的特异性较差，灵敏度也相对较差，所需标准品浓度较高，潜在的污染性较高，HPLC法所需仪器设备投资大，操作技术要求高，净化柱消耗较多，检测成本较高，免疫亲和柱特异性较好，但需结合HPLC仪和荧光光度计才能定量检测，检测技术要求和成本较高，而ELISA法相比而言，操作简便，快捷，污染较小，灵敏度也较高，适合批量样品的普检和筛选，特别是研制成功的试剂盒，给检测人员带来很大的方便，同时，也节省了成本，符合目前国际上检测领域的发展方向。免疫胶体金层析技术不需任何仪器设备和试剂，特别适合于基层单位大批量时间紧的检测和大面积普查，因此酶免疫法在饲料安全分析中应用广泛。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测3-甲基喹噁啉-2-羧酸的试剂盒。

本发明提供的检测3-甲基喹噁啉-2-羧酸的酶联免疫试剂盒，包括抗喹乙醇代谢物单克隆抗体杂交瘤细胞5A2分泌的单克隆抗体。所述抗喹乙醇代谢物单克隆抗体杂交瘤细胞5A2(简称杂交瘤细胞5A2)已于2012年2月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.5778。

所述试剂盒可为如下1)至4)中的任意一种：

1)包括式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物、所述单克隆抗体和酶标记抗抗体的试剂盒；其中，所述偶联物作为包被原；

2)包括式(I)所示化合物的酶标记物、所述单克隆抗体和抗抗体的试剂盒；其中，所述抗抗体作为包被原；

3)包括式(I)所示化合物的酶标记物和所述单克隆抗体的试剂盒；其中，所述单克隆抗体作为包被原；

4)包括式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物和所述单克隆抗体的酶标记物的试剂盒；其中，所述偶联物作为包被原。

式(I)。

所述载体蛋白可为卵清蛋白(OVA)或牛血清白蛋白(BSA)。

所述偶联物中，式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联比具体可为(11-8)∶1。所述偶联比指的是摩尔比。式(I)所示化合物与所述载体蛋白具体可通过活性酯法偶联。所述偶联物具体可如式(II)所示。

式(II)。

所述试剂盒还包括洗涤液、样品浓缩液、底物显色液和终止液中的至少一种。

每1升洗涤液可按照如下方法配制得到：将10ml吐温20、5g叠氮化钠和990ml磷酸盐缓冲液混合，得到洗涤液。所述磷酸盐缓冲液可为pH7.2-7.6、0.005M-0.015M的磷酸盐缓冲液，具体可为的浓度可为pH7.4、0.01M)的磷酸钠缓冲液。

所述样品浓缩液可为浓度为0.03mol/L-0.05mol/L的磷酸盐缓冲液，优选为pH7.4、0.04mol/L的PBS缓冲液。

所述底物显色液包括显色液A和显色液B，可为独立包装的显色液A和显色液B，也可直接将显色液A和显色液B等体积混合得到。所述显色液可为过氧化氢溶液或过氧化脲溶液；所述显色液B可为邻苯二胺(OPD)溶液或四甲基联苯胺(TMB)溶液。所述显色液A具体可为2％(g/100ml)过氧化脲水溶液。所述显色液B具体可为1％(g/100ml)四甲基联苯胺水溶液。

所述终止液具体可为0.2M硫酸水溶液。

以上任一所述试剂盒均可用于检测喹乙醇代谢物(如3-甲基喹噁啉-2羧酸或喹噁啉-2羧酸)。

以上任一所述试剂盒均可用于检测待测样本中是否含有喹乙醇代谢物(如3-甲基喹噁啉-2羧酸或喹噁啉-2羧酸)。