[发明专利]针对血管生成素2的微小RNA

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及微小RNA在治疗疾病中的用途，尤其涉及靶向并抑制血管生成素2表达的miR-542-3p在治疗血管新生相关疾病如癌症中的用途。

背景技术

血管新生(angiogenesis)是指毛细血管从已存在的血管周围生发的过程。在伤口愈合、女性经期、胎儿生长发育等生理活动中扮演重要的角色。正常情况下，血管新生过程受到生物体严格的、多层次的调控，机体能够在短时间内打开或关闭这些控制系统。近年来，越来越多的研究发现，血管新生与多种疾病密切相关。1971年Folkman教授(Folkman J.N Engl J Med.1971；285：1182-1186)提出肿瘤的生长依赖于血管新生。肿瘤组织中的新生血管为肿瘤生长提供营养和氧气，也是肿瘤侵袭和转移的主要途径。通常，良性肿瘤血管生成稀少，血管生长缓慢；而大多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。因此，抑制血管新生能明显阻止肿瘤生长和扩散转移。

血管生成素(Angiopoietin，Ang)家族蛋白是近年来发现的一个既含受体激动剂又含受体抑制剂的促血管生成家族，现已发现4个成员：Ang-1、Ang-2、Ang-3和Ang-4。这些成员均能识别内皮细胞特异性的酪氨酸激酶受体Tie-2，但功能并不相同。Ang-1和Ang-2基因分别位于人类染色体的8q22.3-q23及8p23.1，编码产物均为分子量约为75kDa的糖蛋白，有60％的同源性。Ang-1和Ang-2主要由血管内皮细胞表达产生，但作用大不相同。Ang-1通过激活Tie-2促进内皮细胞的生存、趋化、稳定血管和防止渗漏，从而维持正常血管的完整性和内皮屏障；Ang-2可通过抑制Tie-2的活化参与血管的重塑和血管内膜的去稳定作用。在血管新生起始时，存在于血管周围的壁细胞首先与内皮细胞分离。在这个过程中，Ang-2可通过拮抗Ang-1在破坏血管的同时松解血管结构，降解血管基底膜来消除周围细胞对血管形成的限制，并激活内皮细胞。

在肿瘤存在的病理条件下，Ang-2在肿瘤组织中的表达明显高于正常组织，且特异表达于肿瘤边缘的血管重建区，参与肿瘤新生血管的形成、延续，影响肿瘤的生长和转移(Huang H，et al.Nat Rev Cancer.2010；10：575-586)。在肿瘤细胞大量分泌VEGF的情况下，活化的内皮细胞迅速增殖、侵袭和迁移，启动血管新生。同时，由于Ang-2持续高表达对Ang-1产生的过度拮抗作用，新生的肿瘤血管管壁通常不完整，渗透性高。这使得肿瘤细胞不需经过复杂的侵袭过程，就能够直接穿透到血管内进入循环并在远端部位形成转移。另外，也有研究发现，Ang/Tie2系统对淋巴管的发育和生长也有重要影响。肿瘤组织中Ang-2的高表达会诱导新生淋巴管的形成，从而促进肿瘤的生长和转移(Faqiani E，et al.Cancer Res.2011；71：5717-5727)。近年来，以促血管生长因子为靶标进行抗肿瘤血管生成的研究成为热点，以Ang-2及其受体Tie-2为靶标进行抗肿瘤治疗具有潜在的应用价值。

微小RNA(miRNA，microRNA)是一类长度很短的、非编码调控的、单链小分子RNA，约18～24nt，由一段具有发夹环结构的长度为70～80nt的单链RNA前体(pre-miRNA)剪切后生成。它通过与靶mRNA分子的3’端非编码区域(3′-untranslated region，3′UTR)互补匹配导致该mRNA分子的翻译受到抑制，或者降解该mRNA，从而抑制靶基因表达。

miRNA可以参与多种病理、生理过程的调控，例如细胞发育、分化、干细胞功能等。而且，miRNA在肿瘤发生、发展当中亦发挥重要作用，参与癌细胞免疫逃逸、免于凋亡而无限增殖、肿瘤血管生成、转移等调控过程。大量数据表明，microRNA与肿瘤进展具有良好的相关性，一些microRNA极有可能成为新的肿瘤标志物和治疗靶点。美国国家癌症研究院的资料显示，截至2011年11月，全球有33项正在进行的临床试验涉及microRNA。

但是到目前为止，尚未有调控Ang-2的miRNA的报道。

发明概述

本发明通过构建携带血管生成素2(Ang-2)mRNA 3’端非翻译区的荧光素酶报告基因载体并与人源微小RNA共转染内皮细胞，发现了miR-542-3p及其突变体能够靶向Ang-2mRNA 3’端非翻译区并抑制报告基因的表达。