[发明专利]胃幽门螺旋杆菌乳胶法检测试剂盒及其制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及免疫层析技术领域，具体涉及一种胃幽门螺旋杆菌乳胶法检测试剂盒及其制备工艺。

背景技术

胃幽门螺旋杆菌Helicobacter Pylori(简称HP)是人体胃粘膜内的一种螺旋状革兰氏阴性细菌。这种细菌是导致慢性胃炎、胃溃疡以及十二指肠溃疡甚至胃癌的元凶。一般认为胃幽门螺旋杆菌感染的临床过程是这样的：胃幽门螺旋杆菌经口到达胃粘膜后定居感染，经数周或数月引发慢性、浅表性胃炎，数年或数十年后发展成为十二指肠溃疡、胃溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤、慢性萎缩性胃炎等，而后者是导致胃癌最危险的因素。专家们认为，胃幽门螺旋杆菌感染使患胃癌的危险增加了2.7-12倍，如果没有幽门螺旋杆菌感染，至少有35％-89％的胃癌不会发生。

尿素酶是一种催化尿素水解成氨和碳酸的镍离子依赖性酶，为幽门螺杆菌中表达量最丰富的蛋白质，占HP总蛋白的5-10％，尿素酶通过中和胃酸帮助细菌在胃内的定居并为细菌蛋白质合成提供氨，对HP在胃内的寄生和致病都起重要作用。尿素酶分子量为550KD左右，其单体由A、B两个亚单位组成，A、B两个亚单位的分子量分别为30KD和66KD左右；其中尿素酶B亚基是尿素酶活性亚单位，在各HP菌株中具有很好的保守性，被公认为HP疫苗的理想抗原；针对尿素酶A亚基的HP疫苗同样能取得良好的保护作用，因此，尿素酶A、B亚基都是HP抗体制备的理想抗原。

胃幽门螺旋杆菌在世界不同种族、不同地区的人群中均有感染，可以说是成年人中最广泛的慢性细菌性感染。感染率随年龄增加而上升，发展中国家约为80％，发达国家约为40％。我国20岁-40岁的感染率为45.4％-63.6％，70岁以上的感染率高达78.9％。因此，检测人血液中是否存在HP抗体对于诊断HP感染具有非常现实的临床意义。

目前检测HP的方法主要有：

(1)酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验：通过检测血清中的HP抗体来确定人体中HP的存在，该种方法特异性高，且能进行定量分析，但是不能鉴别既往感染及现疫病人。

(2)尿素呼气试验和PCR检测试验：通过测定HP在体内产生的尿素酶的代谢物或基因的方法来确定HP的存在，该种方法灵敏度高，但操作复杂、设备昂贵，不适于基层检测工作，推广使用有局限性。

(3)细菌培养及其他病理学检测法等，这些方法也普遍具有灵敏度高、特异性强的优点，但也存在培养及病理学方法的检测条件要求严格、操作复杂、需要专业人员操作的局限性。

所以，目前急需一种快速、准确、灵敏度高、不需要任何大型设备就能检测HP的方法，该种方法的建立有利于胃幽门螺旋杆菌检测在基层的普及与推广应用，对胃幽门螺旋杆菌导致的慢性胃炎、胃溃疡以及十二指肠溃疡甚至胃癌的防治具有重大的临床意义。

乳胶层析法是以彩色乳胶为标记物的免疫层析法，其检测原理与胶体金免疫层析法相类似，它不需要仪器，直接用肉眼判读结果，具有操作简单、快速，试剂稳定性好，易保存，单人份独立包装，试剂损耗少等优点，适合临床患者、健康体检者等标本的快速筛查。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术缺陷，从提高检测灵敏度出发，提供一种检测灵敏度高、特异性强、检测快速的胃幽门螺旋杆菌乳胶法检测试剂盒。

本发明一方面公开了一种胃幽门螺旋杆菌乳胶法检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述衬底上，所述致敏乳胶聚酯膜上包被有彩色乳胶颗粒标记的抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I，免疫硝酸纤维素膜上设有包被了抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体II的检测线和包被了羊抗兔IgG的质控线。

较优的，所述彩色乳胶颗粒为粒径280～310nm的聚苯乙烯颗粒。

较优的，所述彩色乳胶颗粒的颜色为红色。

较优的，所述抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I是以融合蛋白Ure-BA为抗原物质，免疫动物制备获得的多克隆抗体，所述融合蛋白Ure-BA序列见SEQ ID NO：5。

较优的，所述用于制备多克隆抗体的动物为家兔。

本发明致敏乳胶聚酯膜上标记有彩色乳胶颗粒的抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I为多克隆抗体，免疫硝酸纤维素膜检测线(T线)包被的抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体II为单克隆抗体。

概括的说，本发明抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I这一多抗的制备步骤包括：