[发明专利]一种植物油中植物甾醇的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食用油营养添加剂检测的技术领域，具体的涉及一种植物油中植物甾醇的检测方法。 

背景技术

植物油是植物甾醇含量较为丰富的食品之一，而其中玉米油中的植物甾醇含量较高。近年来，随着心血管疾病的频繁发生，人们的保健意识也随之增强，植物甾醇作为一种极具营养价值的营养添加剂广泛用于食品中以降低人体胆固醇。植物甾醇对人体具有较强的抗炎作用，具有能够抑制人体对胆固醇的吸收、促进胆固醇的降解代谢、抑制胆固醇的生化合成等作用；用于预防治疗冠状动脉粥样硬化类的心脏病，对治疗溃疡、皮肤鳞癌、宫颈癌等有明显的疗效；可促进伤口愈合，使肌肉增生、增强毛细血管循环；还可作为胆结石形成的阻止剂。 

现有植物甾醇的检测方法主要有酶法、化学特征反应鉴定法、薄层层析法、红外光谱法、气相色谱法等。其中酶法只能测定总甾醇含量，不能检测各甾醇组分分别的含量，这些方法操作过程复杂，成本高，安全性能差。 

应用化学特征反应鉴定法、薄层层析法、红外光谱法等普遍存在的缺点是鉴定能力低，对样品的纯度要求高，有的甚至安全性很差。 

应用气相色谱法检测因使用高压以及可燃性气体，从而对其的安全性要求较高。 

发明内容

本发明的目的在于针对上述存在的缺陷而提供一种植物油中植物甾醇的检测方法，该方法操作简单，精确度、安全性高，经济实惠。 

本发明的技术方案为：一种植物油中植物甾醇的检测方法，其步骤如下：（1）样品的处理：首先称取0.1g～1g样品放于皂化瓶中，然后在皂化瓶中加入30mL～50mL质量分数为60% 的KOH水溶液和70mL～100mL的无水乙醇（分析纯），摇匀，最后加入3～4颗沸石；（2）样品的皂化：待步骤（1）完成后，将皂化瓶接于回流冷凝管上，在温度为90℃～100℃的条件下进行皂化，皂化时间为2h～3h；（3）提取皂化物：待步骤（2）皂化完成后，用30mL～50mL的无水乙醚（分析纯）提取剂提取皂化瓶中与沸石上的皂化物，将提取液转入分液漏斗 Ⅰ中，静置待提取液分层后上层液体留于分液漏斗Ⅰ中，将下层液体移入分液漏斗Ⅱ中，然后在分液漏斗Ⅱ中加入无水乙醚（分析纯）进行反复提取3～4次，静置分层后将分液漏斗Ⅱ中的上层液体与分液漏斗Ⅰ的上层液体合并，得到最终的乙醚提取液；（4）乙醚提取液的处理:用30 mL～50mL质量分数为3%的NaCL水溶液反复清洗步骤（3）所得的乙醚提取液，振荡分层，弃去下层液体，重复清洗直到弃去的下层液体呈中性，得到的上层液体即为所需提取物；（5）提取物的处理：将步骤（4）中所得的提取物通过盛有5g无水硫酸钠的过滤器进行过滤，将所得的滤液置于旋转蒸发器的圆底蒸发瓶中，然后将圆底蒸发瓶连接蒸发仪器进行提取剂无水乙醚的蒸发，待无水乙醚完全蒸发后，得到所需植物甾醇，取下圆底蒸发瓶用纯乙醇多次清洗溶解圆底蒸发瓶中的植物甾醇，然后转入到100mL容量瓶中用纯乙醇定容，最后经0.45um的微孔滤膜过滤于25mL容量瓶中，试样的制备完成；（6）试样的测试：用进样针吸取步骤（5）所得的试样18 uL～22uL，在进样温度为40℃～50℃，波长为200 nm ～250nm,流速为0.5 mL/min～1.2mL/min的条件下采用高效液相色谱仪得到色谱图，然后利用外标法将色谱图中各甾醇的峰面积与相对应甾醇的标准曲线对照得出试样中各甾醇的浓度。 

所述步骤（6）中高效液相色谱外标法的标准曲线制备步骤如下：用进样针分别吸取浓度为1mg/ml、0.8mg/ml、0.6mg/ml、 0.4mg/ml、0.2 mg/ml、0 mg/ml的对照品溶液18 uL～22uL，依照步骤（6）所选定的进样条件进样温度40℃～50℃，波长200 nm ～250nm,流速0.5 mL/min～1.2mL/min，测定各浓度下的峰面积值，以进样溶液浓度为纵坐标，相应的峰面积为横坐标，绘制得标准曲线。 

本发明的有益效果为：本发明的检测方法在提取皂化物时所采用的提取剂为无水乙醚（分析纯），无水乙醚的毒性低，价格低廉，气味比较温和，对人体没有太大伤害，并且根据单一变量原则，在本发明所述的检测步骤及检测条件下分别采用正己烷、丙酮、乙醚三种不同的提取剂进行对比实验，得出无水乙醚对甾醇的提取效果好，杂质少，使得后续试样检测所出的色谱图杂质峰少，各甾醇的峰面积大，便于进一步的分析。   

  下面通过三例实验对比进行详细说明。