[发明专利]基于RNAi技术的抗虫制剂及方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域和农业应用领域；更具体地，本发明涉及基于RNAi技术防治鳞翅目害虫的靶标基因，描述了将靶标基因合成为双链RNA制剂并直接应用于鳞翅目害虫田间防治的方法。

背景技术

亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis Guenée)是重要世界性农业害虫，主要危害玉米、高粱、向日葵等重要的粮食经济作物，目前对亚洲玉米螟的防治，仍然是以化学防治为主，但是其对生态环境及粮食安全生产造成了巨大的损害。

化学防治技术的诸多问题已经使得人们不得不寻求更好的害虫治理办法，生物防治虽然可以起到一定的防治作用，但是由于其见效缓慢，效果不明显，受环境影响较大而得不到大众认可，转基因植物可以有效地防治害虫，但是随着单一转基因作物的长期种植，会诱导害虫抗性增加，非靶标害虫危害增加，而且转基因植物安全性目前还存在一些争议，制约着该技术的发展。

RNAi现象自从1991年发现以来迅速发展，研究表明，通过特异基因的RNAi，可以达到定向干涉物种的靶基因，出现某些生理现象，达到研究基因功能的目的，同时，这种现象有着极高的特异性，即同源基因的特定片段对不同物种所发挥的干涉效果并不相同，因此是一种理想的害虫种类特异的防治体系。

目前，利用RNAi技术进行害虫防治已有报道，Baum等(2007)证明v-ATPase对玉米根萤叶甲(Western corn rootworm WCR，Diabrotica virgifera LeConte)有致死效果，可以用于田间防治；同年，Mao等通过将P450的dsRNA导入棉花中，可以导致棉铃虫(cotton bollworm Helicoverpa armigera)死亡；Tian证实通过饲喂的方法可以导致甜菜夜蛾(Spodoptera exigua Hübner)的死亡，一系列的综述文章都表明，RNAi技术作为一种新型的害虫防治方法是完全可行的。

但是，之前的研究也表明，基于RNAi技术的害虫防治还有很多问题需要解决，如：1)如何快速高通量的发掘靶标基因；2)如何简便的应用于田间生产；3)抗性问题；4)安全性问题等等。要想利用RNAi技术进行害虫防治，就需要解决以上问题，首先需要获得足够多的、有效的靶标基因，这样，大量的靶标基因通过不同的组合方式，不同的时期使用不同的基因进行防治，可有效地避免害虫抗性的出现。因此，利用RNAi技术的害虫防治集中在靶标基因的获得以及如何方便地应用于田间这两个急需解决的问题，本发明旨在解决这些问题。

发明内容

本发明的目的在于提供基于RNAi技术的抗虫制剂及抗虫方法。

在本发明的第一方面，提供一种分离的多肽，该多肽选自下组：

(a)SEQ ID NO：43-52任一所示氨基酸序列的多肽；

(b)将SEQ ID NO：43-52任一所示氨基酸序列经过一个或多个(如1-20个；较佳地1-15个；更佳地1-10个；更佳地1-5个；如3个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(a)多肽功能的由(a)衍生的多肽。

在本发明的另一方面，提供一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列选自下组：

(a)编码如前所述多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

在另一优选例中，所述的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该多核苷酸选自下组的一种：

(a)SEQ ID NO：1-10、SEQ ID NO：33-42、SEQ ID NO：53-60，任一所示序列的多核苷酸，或互补序列；

(b)与(a)限定的序列在严格条件下杂交的任一多核苷酸或互补序列，其中有害生物对包含至少一条与所述多核苷酸互补的链的dsRNA的摄取，抑制所述有害生物的生长；

(c)与(a)限定的序列具有至少70％(优选至少75％、80％、85％、90％，更优选至少95％、96％、97％、98％、99％)以上的序列一致性的任一多核苷酸或互补序列，其中有害生物对包含至少一条与所述多核苷酸互补的链的dsRNA的摄取，抑制所述有害生物的生长；

(d)包含(a)限定的任一所示序列之至少17-21个连续核苷酸的序列或互补序列，其中有害生物对包含至少一条与所述多核苷酸互补的链的dsRNA的摄取，抑制所述有害生物的生长

在本发明的另一方面，提供一种载体，它含有权所述的多核苷酸中的一种、二种或多种。