[发明专利]一种从动物粪便中提取激素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从动物粪便中提取激素的方法。

背景技术

激素是机体内的重要物质，调节细胞的代谢，影响机体的生理活动。激素水平的测量通常使用血样分析或尿样分析，但两者的采集都会对机体进行干扰，对机体内的真实激素水平造成一定偏差，且对于动物而言，尤其是野外动物或者保护动物，取血或者取尿具有一定的难度，需要进行麻醉或限制，影响机体的激素水平。而粪便是机体的自然代谢产物，能够真实的反应机体的激素水平变化，样本的采集在不干扰机体的情况下很容易获得，而且样本可以在一段时间内有规律的收集，可以在不影响机体内分泌的状态下，重复对同一个体取样，测量在长时间内动物对特殊环境或特定处理的短期激素水平变化。另外，粪便中激素水平的一段时间内总的激素量，受激素分泌的波动影响较小，不因为应激反应而影响测量结果，可以精确地代表机体激素的水平状态。

发明内容

本发明旨在提供一种操作方便、快捷的粪便激素提取方法，利用粪便即可完成机体激素水平的检测，在不能完成采血或采尿的情况下利用粪便反映出机体的激素水平，对机体也具有保护作用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的从动物粪便中提取激素的方法，包括下述步骤：

（1）将粪便置于冷冻干燥机中干燥充分，将干燥粪样研磨成粉末；

（2）用电子天平准确称取样品粉末100mg，置于5ml离心管A中； 

（3）向离心管A中加无水乙醇和双蒸水各1ml，涡旋振荡10min后静置2h；

（4）将离心管A再次涡旋震荡2-3min，3000rpm离心8-12min，取上清液1ml置于5ml的离心管B中；

（5）向A管中加2ml无水甲醇进行重提；

（6）将离心管A进行涡旋振荡8-12min，3000rpm离心8-12min，取上清液2ml置于B管中混匀两次所取上清液，取1.5ml装于一只2ml的离心管中。60℃水浴干燥，置于4℃以待检测。

本发明的从粪便中提取激素的方法优选为：

（1）将粪便置于冷冻干燥机中处理24 h，将干燥处理后的粪样研磨成粉末；

（2）用万级电子天平准确称取样品粉末100mg，置于5ml离心管A中； 

（3）向离心管A中加无水乙醇和双蒸水各1ml，涡旋振荡10min后静置2h；

（4）将离心管A再次涡旋震荡2min，3000rpm离心10min，取上清液1ml置于5ml的离心管B中；

（5）向A管中加2ml无水甲醇进行重提；

（6）将离心管A进行涡旋振荡10min，3000rpm离心10min，取上清液2ml置于B管中混匀两次所取上清液，取1.5ml装于一只2ml的离心管中。60℃水浴干燥，置于4℃以待检测。

本发明的技术关键在于该提取方法的优点在于：所需仪器、试剂较少。方法简便，快捷，操作性高。回收率高，安全可靠，能够真实反应机体的激素水平。

附图说明

图1是实施例1中的结果图。

图2是实施例2中的结果图。

具体实施方式

实施例1 

（一）自然状态下接收雌雄昆明小鼠雌雄各10只的粪便和对应尿液。

（二） 应用本实施例的方法对小白鼠粪便激素进行提取。

（1）将粪便置于冷冻干燥机中处理24 h，将干燥粪样研磨成粉末；

（2）用电子天平准确称取样品粉末100mg，置于5ml离心管A中； 

（3）向离心管A中加无水乙醇和双蒸水各1ml，涡旋振荡10min后静置2h；

（4）将离心管A再次涡旋震荡2-3min，3000rpm离心8-12min，取上清液1ml置于5ml的离心管B中；

（5）向A管中加2ml无水甲醇进行重提；

（6）将离心管A进行涡旋振荡8-12min，3000rpm离心8-12min，取上清液2ml置于B管中混匀两次所取上清液，取1.5ml装于一只2ml的离心管中。60℃水浴干燥，置于4 ℃以待检测。

（3）利用ELISA法对粪便提取的激素和尿液中的激素进行测定，测量睾酮、雌二醇的含量。

（三）利用ELISA法对粪便提取的激素和尿液中的激素进行测量，测量睾酮、雌二醇的含量。

（2）结果

结果见图1，应用本发明方法提取的激素和尿液中的激素含量无显著差异，粪便激素提取方法安全可靠。

实施例2