[发明专利]水产品中硝基呋喃代谢物检测的前处理方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，更具体涉及一种水产品中硝基呋喃代谢物检测的前处理方法。

背景技术

硝基呋喃类药物（Nitrofurans）是人工合成的具有5-硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物，它们作用于微生物酶系统，抑制乙酰辅酶A，干扰微生物糖类的代谢，对常见的革兰氏阳性菌、阴性菌均有作用，主要适用于肠道细菌感染及原虫病。硝基呋喃类对光敏感，在生物体内代谢迅速，由于原药及其在动物体内残留的代谢产物有致畸、致突变和致癌的危险，出于安全性考虑，欧美等发达国家及我国先后颁布了禁止使用该类兽药的禁令。所以在食品安全的检测中检测硝基呋喃代谢物。入世后，动物源性食品中抗生素残留量的检出已成为世界肉类贸易中的重要技术指标和技术壁垒之一。我国出口欧盟的水产品，如鱼虾等曾被检出过含有呋喃唑酮、呋喃西林等兽药残留，这已严重制约了我国水产品的出口。

近年来报导了一系列在鱼、虾、贝类等样品中检测硝基呋喃类代谢物的检测方法，其中以酶联免疫法的报导最多，并有一些商品化的试剂盒出现。然而，酶联免疫法的缺点也很明显，一般一个试剂盒只能检测一种硝基呋喃类代谢物，并且试剂盒的成本较高。因此，目前对硝基呋喃类代谢物的检测，国际上通用的方法依旧是经2-硝基苯甲醛衍生化后用液相色谱-串联质谱法测定，而该方法的关键是样品的前处理技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种水产品中硝基呋喃代谢物检测的前处理方法,经该方法处理后的待测样品能够直接用液相色谱-串联质谱法进行检测。该前处理方法与现有国标方法相比,具有操作简单有效、成本低、重现性好等优点，具有很强的可操作性。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种水产品中硝基呋喃代谢物检测的前处理方法包括以下步骤：

（1）称取2.00 g(精确至0.01 g)水产品于50 mL离心管中；

（2）往上述离心管中加入0.2 mol/L盐酸15 mL和0.2wt%邻硝基苯甲醛-乙腈溶液0.5 mL，充分涡旋摇匀，在37℃下恒温振荡14~16 h；

（3）将离心管取出，适当冷却后用pH缓冲液调节pH至7.0～7.5；

（4）往离心管中加入20 mL乙酸乙酯，加盖振荡萃取3min，在3500r/min离心5min，用塑料吸管将上清液吸取到150mL鸡心瓶中，40℃下减压旋转蒸发至干；

（5）用2 mL乙腈水（体积比为1：9）溶液和2 mL乙腈饱和正己烷洗脱，洗脱液于15000r/min高速离心分层，取下层清液用0.25 μm微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。

所述的水产品包括鱼、虾、蟹。

所述步骤（3）中的pH缓冲液为磷酸盐缓冲液。

所述步骤（4）中的萃取溶液为乙酸乙酯，萃取次数为1次。

本发明的显著优点为：

（1）在国标方法中的衍生剂用二甲亚砜溶解；本发明则用乙腈溶解，可有效减少样品中的溶剂成分（因为后面会用到乙腈作为洗脱剂），有利于提高后续步骤的洗脱效果。

（2）在本发明中调pH=7-7.5时采用磷酸盐缓冲体系，更有利于调酸；而国标方法直接用NaOH调pH。

（3）流程中直接用20 mL乙酸乙酯萃取一遍后高速离心取此层浓缩；而国标方法萃取2次，每次用量40mL，萃取后用NaCl水溶液洗涤，乙酸乙酯层过无水硫酸钠后浓缩。由于目标物分配比大，流程操作方法简单可行，可有效减少前处理步骤，缩短分析时间。

附图说明

图1是本发明的水产品中硝基呋喃代谢物检测的前处理方法流程图。

图2是呋喃唑酮代谢物（AOZ）的衍生产物的MRM谱图。

图3是呋喃它酮代谢物（AMOZ）的衍生产物的MRM谱图。

图4是呋喃妥因代谢物（AHD）的衍生产物的MRM谱图。

图5是呋喃西林代谢物（SEM）的衍生产物的MRM谱图。

具体实施方式

一种水产品中硝基呋喃代谢物检测的前处理方法包括以下步骤：

（1）称取2.00 g(精确至0.01 g)水产品于50 mL离心管中；

（2）往上述离心管中加入0.2 mol/L盐酸15 mL和0.2wt%邻硝基苯甲醛-乙腈溶液0.5 mL，充分涡旋摇匀，在37℃下恒温振荡14~16 h；

（3）将离心管取出，适当冷却后用pH缓冲液调节pH至7.0～7.5；