[发明专利]一种不对称菁染料的制备及其用于牛血清白蛋白检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种不对称菁染料，具体涉及一种不对称菁染料的制备及其用于微量牛血清白蛋白检测的方法，属于化工高新技术化学及生物化学分析技术领域。

背景技术

菁染料是一种商品化的生物荧光标记用染料，自从1856年Williams发现“豆粉”蓝菁染料以来，光导性能优异的各类菁染料一直受到学者们的广泛关注。每年在各种不同的应用领域都有大量的文献相继报道。如：用作感光胶片的卤化银乳剂的增感剂及无机半导体材料、光盘的记录介质、太阳能电池光敏剂、激光材料、生物分子的荧光探针等。菁染料的合成开发主要研究组有国外Patonay组和Waggoner组等。厦门大学等对花菁染料所做的研究工作较多，他们主要是借鉴Narayanant和Patonay等人的工作来合成用于标记生物大分子的染料。而姚祖光研究组主要研究其在CD-R光盘介质方面的应用。噻唑橙类染料是由Lee等人发现的一类用于网状红细胞分析的不对称菁染料，该类染料与核酸结合后荧光显著增强，目前已被研究者熟悉和使用。但该类染料与牛血清白蛋白相互作用的文献报道不多。本发明提供了一种不对称菁染料用于牛血清白蛋白分子的检测方法。该方法通过染料与牛血清白蛋白的相互作用，利用荧光分光光度计精确的检测出微量的牛血清白蛋白。本发明简单实用，线性响应范围宽，在牛血清白蛋白的定量分析检测领域具有潜在的实际应用价值。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足之处，提供一种不对称菁染料的制备方法及其用于牛血清白蛋白分子的检测方法。该发明合成了一类不对称菁染料，该类染料对微量的牛血清白蛋白具有荧光响应，染料溶液自身几乎无荧光，加入微量的牛血清白蛋白溶液后，染料与蛋白分子相互作用，使染料发出强荧光，依据加入蛋白的量和荧光强度之间呈线性关系，可以用于定量检测牛血清白蛋白分子。

按照本发明提供的技术方案，一种用于牛血清白蛋白检测的不对称菁染料，结构通式如下：

其中X为硫原子、氧原子或-C(CH₃)₂，优选硫原子和氧原子；R₁为长链烷基-(CH₂)_mCH₃，m＝0～7，优选m＝0～2；另一端为喹啉环，喹啉环中的氮原子上连接的R₂为一端含有羟基的长链烷基-(CH₂)nOH，n＝1～6，优选n＝1～3。其中m、n为正整数。

将不对称菁染料配置成的染料母液加入到pH值4～8的磷酸盐缓冲溶液中，配制成检测牛血清白蛋白的荧光试剂，同时将牛血清白蛋白配制成牛血清白蛋白溶液，然后将牛血清白蛋白溶液加入到荧光试剂中，用荧光光谱仪连续扫描记录下一定浓度的荧光试剂及分批次加入牛血清白蛋白溶液以后的荧光光谱图，记录最大荧光发射强度，以牛血清白蛋白的浓度为横坐标、最大荧光发射强度为纵坐标做成标准曲线；然后将未知浓度的牛血清白蛋白样品，在同样的条件下与牛血清白蛋白溶液作用，测其荧光光谱图，取最大荧光强度值，在标准曲线上即得到未知样品的牛血清白蛋白的浓度。

一种用于牛血清白蛋白检测的不对称菁染料的制备方法，由式(2)所示化合物与式(3)所示化合物通过与式(4)所示化合物经缩合反应制得；

其中X为硫原子、氧原子或-C(CH₃)₂，R₁为长链烷基-(CH₂)mCH₃，m＝0～7；另一端为喹啉环，喹啉环中的氮原子上连接的R₂为一端含有羟基的长链烷基-(CH₂)nOH，n＝1～6，其中m、n为正整数；

起始原料为2-甲基苯并噻唑、2-甲基苯并噁唑或2，3，3-三甲基-3H-吲哚衍生物，优选的原料为2-甲基苯并噻唑，通过与卤代烷以摩尔比1∶1～2反应得到2-甲基苯并噻唑季铵盐，再与缩合剂N，N-二苯基甲脒按摩尔比1∶1～1.1反应，得到的产物3-烷基-2-(2-亚乙烯基苯胺)苯并噻唑季铵盐最后与4-甲基喹啉季铵盐按摩尔比1∶1～1.2结合得到目标产物。优选的4-甲基喹啉季铵盐为1-羟乙基-4-甲基喹啉季铵盐。

具体合成步骤：