[发明专利]一种不对称菁染料的制备及其用于牛血清白蛋白检测的方法

权利要求书

1.一种用于牛血清白蛋白检测的不对称菁染料，其特征是结构通式如式(1)所示：

式(1)

其中X为硫原子、氧原子或-C(CH₃)₂，R₁为长链烷基-(CH₂)mCH₃，m＝0～7；另一端为喹啉环，喹啉环中的氮原子上连接的R₂为一端含有羟基的长链烷基-(CH₂)nOH，n＝1～6，其中m、n为正整数；

将不对称菁染料配置成的染料母液加入到pH值4～8的磷酸盐缓冲溶液中，配制成检测牛血清白蛋白的荧光试剂，同时将牛血清白蛋白配制成牛血清白蛋白溶液，然后将牛血清白蛋白溶液加入到荧光试剂中，用荧光光谱仪连续扫描记录下一定浓度的荧光试剂及分批次加入牛血清白蛋白溶液以后的荧光光谱图，记录最大荧光发射强度，以牛血清白蛋白的浓度为横坐标、最大荧光发射强度为纵坐标做成标准曲线；然后将未知浓度的牛血清白蛋白样品，在同样的条件下与牛血清白蛋白溶液作用，测其荧光光谱图，取最大荧光强度值，在标准曲线上即得到未知样品的牛血清白蛋白的浓度。

2.一种用于牛血清白蛋白检测的不对称菁染料的制备方法，其特征是由式(2)所示化合物与式(3)所示化合物通过与式(4)所示化合物经缩合反应制得；

其中X为硫原子、氧原子或-C(CH₃)₂，R₁为长链烷基-(CH₂)mCH₃，m＝0～7；另一端为喹啉环，喹啉环中的氮原子上连接的R₂为一端含有羟基的长链烷基-(CH₂)nOH，n＝1～6，其中m、n为正整数；

起始原料为2-甲基苯并噻唑、2-甲基苯并噁唑或2，3，3-三甲基-3H-吲哚衍生物，优选的原料为2-甲基苯并噻唑，通过与卤代烷以摩尔比1∶1～2反应得到2-甲基苯并噻唑季铵盐，再与缩合剂N，N-二苯基甲脒按摩尔比1∶1～1.1反应，得到的产物3-烷基-2-(2-亚乙烯基苯胺)苯并噻唑季铵盐最后与4-甲基喹啉季铵盐按摩尔比1∶1～1.2结合得到目标产物。优选的4-甲基喹啉季铵盐为1-羟乙基-4-甲基喹啉季铵盐。

具体步骤如下：

(1)2-甲基-3-烷基取代苯并噻唑季铵盐的合成：按2-甲基苯并噻唑∶卤代烷摩尔比为1∶1～2取原料，加入到10mL～100mL的不与原料反应的溶剂中搅拌溶解，50～90℃加热搅拌回流3-10h；冷却，过滤后收集固体粉末，剩余母液继续加热反应，过滤后收集固体粉末，产品未纯化直接做下一步反应；

(2)4-甲基喹啉季铵盐的合成：将4-甲基喹啉和Br(CH₂)_n-OH按照摩尔比1∶1～1.5，依次加入到单口烧瓶中，80～110℃搅拌3h-5h，冷却过滤，空气中干燥后得到固体；

(3)3-烷基-2-(2-亚乙烯基苯胺)苯并噻唑季铵盐的合成：将摩尔比为1∶1～1.1的步骤(1)制备的2-甲基-3-烷基取代苯并噻唑季铵盐和N，N-二苯基甲脒溶解于5～100mL不与原料和产物发生反应的溶剂中，在60～90℃加热搅拌1.5～5h，冷却后用正己烷洗涤，析出固体后过滤，得黄色固体；

(4)不对称菁染料的合成：按步骤(3)制备的3-烷基-2-(2-亚乙烯基苯胺)苯并噻唑季铵盐∶步骤(2)制备的4-甲基喹啉季铵盐摩尔比为1∶1～1.2取料，溶于5mL～100mL吡啶中，在70～100℃搅拌下反应1h～5h，将金属钠盐或钾盐溶于1mL～5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，其中，3-烷基-2-(2-亚乙烯基苯胺)苯并噻唑季铵盐与金属钠盐或钾盐摩尔比为1∶1～2，加入到反应混合物中，继续搅拌15～60min，析出沉淀经过滤，乙醇重结晶得到蓝紫色固体粉末，即得产品不对称菁染料。

3.如权利要求2所述用于牛血清白蛋白检测的不对称菁染料的制备方法，其特征是：步骤(1)所述溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、乙醚或乙腈。

4.如权利要求2所述用于牛血清白蛋白检测的不对称菁染料的制备方法，其特征是：步骤(1)所述卤代烷为溴代烷、碘代烷或对甲基苯磺酸甲酯。

5.如权利要求2所述用于牛血清白蛋白检测的不对称菁染料的制备方法，其特征是：步骤(3)所述溶剂为醋酸、丙酸、甲醇、乙醇或乙腈。