[发明专利]米根霉RH1-5及其分离培养方法

权利要求书

1.米根霉RH1-5，其特征在于：该米根霉RH1-5菌株是从浓香中高温大曲中分离筛选而得，菌种已于2011年11月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，菌种编号为：CGMCC No. 5513。

2.米根霉RH1-5的分离培养方法，其特征在于该分离培养方法包括以下步骤：取中高温大曲适量粉碎后称取10克，于装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡30min获得菌悬液；用无菌吸管吸取菌悬液1.0mL，放入盛有9mL无菌水的试管中，依次用10倍法稀释至不同稀释度，取10^－2、10^－3、10^－4稀释度的样品各1mL加入直径为90mm无菌培养皿中，分别采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基、孟加拉红琼脂培养基、察氏培养基进行平板培养，摇匀后置于恒温培养箱中28℃-32℃倒置培养3-5天；挑取培养皿内形态规则的菌落，在麸皮汁固体斜面培养基上划线培养，进行多次反复的分离纯化，获得单个纯种菌落，镜检确定为霉菌后保藏于麸皮汁固体斜面培养基备用；将所得霉菌菌株点种于筛选培养基平板上，用透明圈法进行糖化霉菌初筛，筛出产糖化酶能力强的微生物，最终筛选出一株霉菌，经26S rDNA序列同源性分析鉴定为米根霉，命名RH1-5。

3.根据权利要求2所述的米根霉RH1-5的分离培养方法，其特征在于所述麸皮汁固体斜面培养基：在1.0L麸皮汁中加入其质量1%葡萄糖、0.5%酵母膏、1%琼脂，PH自然，121℃灭菌15min；其中，麸皮汁制备：加入5-6倍于麸皮重量的水，搅拌均匀煮沸30min，取出过滤得麸皮汁。

4.根据权利要求2所述的米根霉RH1-5的分离培养方法，其特征在于所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）：将200克马铃薯去皮切成小块，于锅中加水1000毫升煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加蔗糖或葡萄糖20克、琼脂10克，煮沸融化并补水至1000毫升。

5.根据权利要求2所述的米根霉RH1-5的分离培养方法，其特征在于所述孟加拉红琼脂养基:购于上海国药集团。

6.根据权利要求2所述的米根霉RH1-5的分离培养方法，其特征在于所述察氏培养基：三角瓶中加入硝酸钠3克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁(MgSO₄·7H₂O) 0.5克、氯化钾 0.5克、硫酸亚铁0.01克、蔗糖30克、琼脂10克、蒸馏水1000毫升，加热溶解得混合液， 121℃杀菌20min，冷却后添加混合液质量的0.05％去氧胆酸钠，再每100ml培养基中加入100ul链霉素。

7.根据权利要求2所述的米根霉RH1-5的分离培养方法，其特征在于所述筛选培养基（g/L）：由可溶性淀粉10g、K₂HPO₄ 0.3 g、MgCO₃或MgSO₄1g、NaCl 0.5g、KNO₃ 1g、琼脂10g组成，pH7.2－7.4，121℃灭菌30min。