[发明专利]一种氧化型辅酶II的酶催化制备方法

权利要求书

1.一种氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：所述制备方法以烟酰胺核苷和三磷酸腺苷二钠盐为原料，使它们在烟酰胺核苷激酶、无机焦磷酸酶、NAD激酶及多聚磷酸激酶四种酶存在下，在pH为4.0~8.5的缓冲溶液中，以及温度10℃~40℃下进行一锅煮反应得到氧化型辅酶II。

2.根据权利要求1所述的氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液、Tri-HCl缓冲溶液或TEA缓冲溶液，缓冲溶液的pH用无机酸或碱来调节。

3.根据权利要求1或2所述的氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：所述的缓冲溶液的浓度为100~500 mM。

4.根据权利要求1所述的氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：所述反应开始时，所述的烟酰胺核苷和三磷酸腺苷二钠盐的浓度分别为10~100 mg/ml和20~200 mg/ml。

5.根据权利要求1至4中任一项权利要求所述的氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：所述烟酰胺核苷激酶、无机焦磷酸酶、NAD激酶及多聚磷酸激酶的加入量分别为5-50mg酶粉/ml缓冲溶液、10-100mg酶粉/ml缓冲溶液、5-50mg酶粉/ ml缓冲溶液和10-100mg酶粉/ ml缓冲溶液。

6.根据权利要求1所述的氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：所述方法还使所述反应在无机盐存在下进行，所述无机盐为选自钠、钾、镁、锌、锰、钴及铁的金属的硫酸、盐酸或磷酸盐中的一种或多种的混合物，所述无机盐的加入量为1-50mg/ml缓冲溶液。

7.根据权利要求6所述的氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：所述无机盐为氯化镁或氯化锰。

8.根据权利要求6或7所述的氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：所述制备方法的实施过程如下： 在反应容器中加入缓冲溶液，然后依次加入烟酰胺核苷、三磷酸腺苷二钠盐、烟酰胺核苷激酶、 无机焦磷酸酶、NAD激酶、多聚磷酸激酶以及无机盐，控制温度10℃~40℃，搅拌反应，利用液相色谱-质谱联用监测反应的转化率，至检测到磷酸腺苷消耗完毕，停止反应。

9.根据权利要求8所述的氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：所述制备方法的实施过程如下：停止反应后，依次经过滤，大孔树脂吸附，冻干，用乙醇和水的混合溶剂重结晶得到所述氧化型辅酶II。

10.据权利要求8所述的氧化型辅酶II的酶催化制备方法，其特征在于：控制反应在温度20℃~40℃下进行。