[发明专利]一种检测磺胺类药物的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测磺胺类药物的试剂盒及方法，具体涉及一种用于检测磺胺类药物的胶体金试纸条，其特别适于牛奶样本中磺胺类药物残留的检测。

技术背景

磺胺类药物(Sulfonamides，SAs)是通过人工合成的氨苯磺胺衍生物，能抑制革兰氏阳性菌及一些阴性菌，可以治疗多种细菌感染，在兽医临床上广泛应用于治疗由敏感细菌感染的各种畜禽疾病，同时还可以作为饲料添加剂提高饲料的转化率和促进动物生长，目前常用的SAs有十几种。但该类药物存在严重副作用，人体中长期存在会导致许多细菌对磺胺类药物产生耐药性，且有潜在的致癌性，因此已引起了国内外的高度重视。我国农业部第235号文件规定其残留限量为100μg/kg。

目前，磺胺类药物残留的检测方法主要有微生物法、理化分析方法和免疫法等。微生物法简便、费用低，但操作费时且敏感性、特异性都较差，在定性定量上都存在困难，不能满足现代残留检测的需要，甚至有些检测结果还达不到最高残留限量的要求；理化法常作为确证方法用于测定动物组织中的药物残留，如气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、气-质联用(GC-MS)、液-质联用(HPLC-MS)等，这些方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用；与之相比，免疫学测定方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点，能够更好地满足我国畜禽养殖户、食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测磺胺类药物的试剂盒。

本发明所提供的试剂盒包括微孔试剂和试纸，微孔试剂具有微孔塞，试纸包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜，其依次连接；所述微孔试剂中冻干有磺胺类药物特异性抗体-胶体金标记物；磺胺类药物特异性抗体可为磺胺类药物单克隆抗体或磺胺类药物多克隆抗体；反应膜上包括检测区和质控区；当磺胺类药物特异性抗体为磺胺类药物单克隆抗体时，检测区包被磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗鼠抗抗体；当磺胺类药物特异性抗体为磺胺类药物多克隆抗体时，检测区包被磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗兔抗抗体。

所述磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物是由磺胺类药物半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述磺胺类药物特异性抗体-胶体金标记物中的磺胺类药物特异性抗体是以磺胺类药物半抗原-载体蛋白作为免疫原制备获得。

所述磺胺类药物为磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异噁唑、磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺苯酰、磺胺多辛。

所述样品吸收垫上粘贴有保护膜，为检测端，上面有MAX标记线。

所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一端，所述质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试剂盒的方法，其包括步骤：

1)制备冻干有磺胺类药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2)制备具有包被磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜；

3)将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4)将1)和3)制备好的冻干有磺胺类药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

具体地说，步骤包括：

1)将4-乙酰氨基苯磺酰氯与6-氨基乙酸反应，制备磺胺类药物半抗原；

2)将磺胺类药物半抗原与载体蛋白偶联，制备磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物；

3)用磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌磺胺类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞株或用磺胺类药物半抗原-载体蛋白免疫兔，得到磺胺类药物多克隆抗体；

4)提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠IgG抗体或羊抗兔抗抗体；

5)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；