[发明专利]慢性髓性白血病易感基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种慢性髓性白血病易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估慢性髓性白血病发病的风险级别，并作为预防和治疗慢性髓性白血病的方向指导。

背景技术

慢性髓性白血病(CML)是骨髓造血干细胞克隆性增值形成的恶性肿瘤，占成人白血病的15％，全球年发病率为1.6-2/10万人。我国CML患者较西方更为年轻化，国内几个地区的流行病学调查显示CML中位发病年龄45-50岁，而西方国家CML的中位发病年龄65岁。

目前，慢性髓性白血病易感基因检测主要依据慢性髓性白血病家族史和基因多态性诊断试验。基因多态性诊断实验主要围绕CYP1A1基因上ILe462Val位点多态性，GSTT1基因是否缺失(Null/Present)基因进行。

CYP1A1编码的芳烃羟化酶，是活化烟草中多环芳烃类化合物如苯并芘(B〔a〕P)的主要酶类，而B〔a〕P经过I相代谢反应激活后的产物苯并芘-二醇环氧化物(BPDE)致癌性更强。CYP1A1的多态性主要表现在Exon7多态位点，其第4889位置出现了A→G的转换，使与该蛋白的亚铁血红素结合区相关的第462位的异亮氨酸(Ile)被缬氨酸(Val)所替代，故又称为Ile/Val多态。Ile/Val多态有三种基因型：Ile/Ile(野生型)，Ile/Val(突变杂合型)和Val/Val(突变纯合型)。Ile462Val多态的突变基因表达的CYP1A1酶活性比正常基因表达的酶活性明显增高，可产生高诱导活性的CYP1A1酶，使多环芳烃类化合物活化速率加快，导致多种癌症的发生风险增高。因此该位点可以作为慢性髓性白血病易感性的遗传检测因子。

谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)属于II相代谢酶，能促进各种亲电子的化合物(包括环境致癌物及其中间代谢产物)与谷胱甘肽结合，形成易溶于水的化合物排除体外，是与毒物或致癌物的解毒代谢有关的酶类，已知人类GSTs家族中GSTM1和GSTT1与肿瘤发生的关系比较密切。GSTT1具有present和null两个等位基因，其中present具有正常的酶活性，而null基因是指结构基因缺失的纯合子，又称为空白基因型，缺乏GSTT1酶活性。正常的GSTT1酶活性可能通过促进致癌剂的亲电作用及从体内的排除而保护易感组织，防止体细胞的DNA突变，而GSTT1基因的纯合缺失可能会降低或丧失机体代谢及排出致癌物的功能，从而具有较大的肿瘤危险性。因此可以将GSTT1基因的缺失基因型作为慢性髓性白血病发生的危险因素之一。

综上所述，鉴于CYP1A1、GSTT1在慢性髓性白血病变过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出在慢性髓性白血病发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患慢性髓性白血病的高危人群，从而有针对性的预防和治疗慢性髓性白血病，这对于降低慢性髓性白血病的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于CYP1A1基因上ILe462Val位点，GSTT1基因是否缺失(Null/Present)的2个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估慢性髓性白血病发病的危险因子的基础上，本发明提供一种慢性髓性白血病易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测CYP1A1基因上ILe462Val位点，GSTT1基因是否缺失(Null/Present)的2个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等)；

PCR产物纯化组件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA测序反应组件(包括BigDye mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对(每条引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。

测序反应体系：25％BigDye mix 1ul；3.2uM DNA测序引物1ul；125mMEDTA溶液1ul；100％乙醇溶液15ul；70％乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O2ul。