[发明专利]一种DF1细胞培养外源性禽白血病病毒的快速检测方法

权利要求书

1.一种DF1细胞培养外源性禽白血病病毒的快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1）DF1细胞的培养

DF1细胞传代于24孔细胞培养板，并置于39℃、5%CO₂培养箱中进行培养，培养至DF1细胞长成70%-80%单层；培养基为含10%胎牛血清的高糖细胞培养基DMEM；

2） 鸡抗凝血的采集与处理

常规方法无菌采集鸡抗凝血1ml，1500rpm离心5min取白细胞，接种到步骤１培养至长成70%-80%单层的DF1细胞；再向24孔细胞培养板中每孔中加入100μl待检样品，置于39℃、5%CO₂培养箱中继续培养2 h，然后换成含1%胎牛血清的高糖细胞培养基DMEM，再置于39℃、5%CO₂培养箱中培养；

3）DF1细胞的收集

培养4d-5d后倒掉上述细胞培养基， 24孔细胞培养板中每孔加入500μl pH 7.2的磷酸盐缓冲液PBS：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na₂HPO₄ 10mmol/L， KH₂PO₄ 2mmol/L，-20℃冻存至少1h；

4）DF1细胞中p27抗原的检测

取出上述冻存的DF1细胞，融化后以3000rpm离心5min后取上层液体，吸取100μl上层液体加到p27抗原反应板中，按ELISA试剂盒说明书检测DF1细胞中的p27抗原，并通过酶标仪读数进行结果判定；当样品与阳性对照比值S/P值大于0.2时，即判定该样品阳性。