[发明专利]一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体及其制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及的一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体及其制作方法属于动保行业兽用生物制品领域，属于抗体药物，所提供卵黄抗体用于诊断、检测、预防和治疗禽流感和传染性支气管炎。

背景技术

禽流感是“禽流行性感冒”的简称，是由Ａ型流感病毒引起的禽类烈性传染病，又称“真性鸡瘟”或“欧洲鸡瘟”，是一种人畜共患病，对人类健康存在极大威胁。临床主要表现为急性高致死性，产蛋量下降，轻度呼吸系统疾病等。禽流感是全世界范围内的禽类传染病，因对养禽业造成的毁灭性经济损失而被视为严重威胁家禽养殖业的头号传染病，１００多年来人类尚未发现有效的预防和治疗方法。

从2003 年12 月开始，由H5N1 禽流感病毒引起的高致病性禽流感突袭亚洲,在不到2 个月的时间内,席卷了韩国、日本、越南、泰国、柬埔寨、老挝、中国和印度尼西亚等8 个东亚和南亚国家。此次禽流感流行的规模之大、地理分布范围之广、破坏程度之深在人类养禽业历史上均是史无前例的。当前，禽流感在世界局部地区仍然活跃，疫情范围呈继续扩大之势。据不完全统计, 从2003年到现在，仅亚洲各国死亡或淘汰的禽只总数大约,15亿只，全球已有超过1000人感染禽流感，因患禽流感死亡的人数已接近700人。

发生禽流感时，往往伴发传染性支气管炎。两者互相影响，往往加重快速死亡。尽管当前已开发出多种治疗禽流感和传染性支气管炎的药物，诸如利巴韦林、金刚烷胺、病毒唑、碘苷、阿昔洛韦、更昔洛韦等，并制定出许多防控方案，取得一定成效，但是临床情况千差万别，往往导致本就捉襟见肘的防控方案更显得力不从心，而且化学药物因越来越多的副作用和食品安全隐患而由农业部宣布禁止使用。

在生物药物领域，除去做疫苗免疫就是用抗体药物临时治疗。疫苗用的毒株虽然开始增多，但是与临床需求相比还是有很大差距。疫苗作为商品从科研到市场以及靶动物是一个很慢长的程序，因此，疫苗免疫如杯水车薪，临时救急的还要首推抗体药物。

当前卵黄抗体提取纯化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、辛酸萃取法、盐析法等，这些方法收率低、杂蛋白多、产品活性低。

发明内容

本发明旨在提供一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体及其制作方法。

本发明所提供的卵黄抗体含有两类抗体，用于检测、预防和治疗禽流感和传染性支气管炎。

其制作方法如下： 

1)、购买禽流感（H5+H9）二价灭活疫苗（H5N1 Re-5株+H9N2 Re-2株）、生理盐水存储于2～8℃备用；鸡传染性支气管炎活疫苗（H120、H52、W93株）新城疫活疫苗（C30-86株）、鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)存储于-15℃以下备用；

2)、购买经检疫合格的SPF蛋鸡雏作隔离饲养;

3)、分别于21日龄、35日龄、70日龄、110日龄给全鸡群做禽流感（H5+H9）二价灭活疫苗（H5N1 Re-5株+H9N2 Re-2株）免疫，颈部皮下注射分别依次为2羽份、4羽份、8羽份、10羽份；以后每4个月重复一次颈部皮下注射10羽份;

4)、在10日龄、30日龄、60日龄时，给鸡全群做传染性支气管炎活疫苗（H120株、W93株）免疫，饮水途径，剂量皆分别依次为2羽份、4羽份、8羽份;

5)、在100日龄时给鸡全群做传染性支气管炎活疫苗（H52株、W93株）免疫，饮水途径，剂量皆为10羽份；以后每隔3个月重复一次;

6)、自130～150日龄起每日检测鸡蛋，将禽流感HI试验抗体水平在1：128以上、并且传染性支气管炎病毒中和试验抗体效价在1：32以上的保存在4℃环境备用;

7)、在超净台上收集蛋黄，按3～5倍比例加入灭菌蒸馏水搅拌30分钟以上，配成均一的蛋黄液，转移至4℃环境冷藏、静置12小时，用过滤气泵回收上清液;

8)、将含卵黄抗体的蛋黄上清液依次通过0.45微米和0.22微米的滤膜进行超滤浓缩，收集介于两种滤膜之间的物质即为卵黄抗体的浓缩液;

9)、将卵黄抗体浓缩液做50～56℃减压干燥，制成卵黄抗体干粉，方便保存;

10)、将卵黄抗体干粉按照一定的剂量分装即可。