[发明专利]癌症病变前期CDK8的mRNA水平原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，更具体地说，是涉及与黑色色癌病理演变mRNA表达改变(病理演变过程)的相关检测技术。  

背景技术

根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数260万，死亡人数近210万，患者700多万，全球每年新增癌症患者800万，死亡人数接近800万，患者约有8400多万人，到2020年以上人数将翻一番，这是一组可怕的数字。癌症诊治成本越来越高，按癌症患者的年治疗费用20万（贫穷地区可能偏高，发达地区可能远远高出20万），700多万患者，每年的花费是一点四万亿人民币，扣除成本35%约四千亿，每年约有一万亿人民币白白消耗了。而且，癌症患者大部分会在治疗后不久死亡。因此，现有的临床癌症诊治模式一定要改变，本发明的创新点是提前做到预防性筛查，然后及时介入预防性调控和预防性治疗，做到基因水平癌症的治未病。

2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等八家单位做了一个年度报告，对1972年发起的抗癌大战进行回顾，报告认为人类在抗癌大战中是失败，结论是癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1.肿瘤细胞异质性（多态性）；2.肿瘤细胞耐药性；3.抗癌药物设计思路不完善（动物模型设计不科学）等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。

本发明人在长期研究中发现，导致癌症死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期诊断。依照现有的临床医学影像（B超、CT、核磁共振成像等）及和其它生化（癌抗原、癌胚抗原、糖类激素、细胞膜因子、细胞核因子、细胞流式技术）指标来诊断癌症，都是肿瘤形成后诊断，前者要有组织学变化或已有占位性病变，后者大部分是肿瘤形成后所分泌、释放、或肿瘤的标记物。传统临床观念认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断，这一概念值得认真讨论，2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度来分析，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是5年或10年、甚至是10年以上（特殊病例除外），很难证实的是在这个病理演变过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶，可能癌细胞早已迁移到其它组织或器官生长。临床研究早已证实，一旦形成肿块的同时，其它癌细胞通过不同途径迁移到其它部位克隆生长，一旦切除原发灶后，其它器官复发灶或多发癌块灶先后形成。因此，在临床上以2公分以下的癌肿块大小来界定早期与否，不够严谨（有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中），其实这时已经是晚期诊断和晚期治疗，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，为了寻求更早期的诊断癌症、治疗癌症、以及预防癌症，已取得长足进步。至今，我们已有可能在基因的一级转录功能产物（mRNA水平）上做更精确的早期筛查和诊断，在癌变前期或癌细胞形成（单克隆）前,就可以做到早期预测和筛查。本发明采用核酸原位杂交技术，选择多组临床标本（癌症病人、高危人群、正常对照），对CDK8基因与黑色素癌的早期预警进行检测分析。

细胞周期蛋白依赖性激酶8（CDK8）基因被发现在很多黑素瘤中表达水平增高。mH2A的失去通过CDK8的转录上调促进肿瘤生长和转移，而CDK8是一个已知的致癌基因（大肠癌基因）。因此，这项研究揭示了一个由染色质修饰所施加的新的肿瘤抑制机制癌症是一种遗传和表观遗传学变化疾病，尽管越来越多的证据显示肿瘤发生发展需要染色质介导的变化，如DNA甲基化，但组蛋白变体在癌症发生发展中的作用目前还不清楚。组蛋白变体在核小体内替代传统的组蛋白，并把独特的生物功能传递给染色质。

纽约西奈山医学院的Avnish Kapoor等报道了组蛋白变体macroH2A (mH2A)抑制恶性黑色素瘤发展的研究。缺少mH2A亚型，组蛋白变体一般与染色质相关并微调发育基因表达程序。在低度恶性黑色素瘤细胞中敲掉mH2A亚型导致细胞在体外的增殖和迁移，以及在体内的生长和转移。恢复mH2A亚型的表达可以在体内和体外挽救这些恶性表型。研究表明缺少mH2A的肿瘤促进作用是通过直接转录上调CDK8介导的，起码是部分介导的。CDK8是一种大肠癌基因，抑制CDK8可以抑制黑色素瘤细胞增殖，敲掉CDK8耗尽mH2A可以抑制因mH2A丢失而引起的增殖优势。而且黑色素瘤患者存在mH2A 和CDK8表达水平之间明显的负相关。