[发明专利]重金属诱导下黄孢原毛平革菌胞外分泌蛋白的提取方法

权利要求书

1.一种重金属诱导下黄孢原毛平革菌胞外分泌蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)培养过滤分离：先液态培养黄孢原毛平革菌，再加入镉离子溶液继续培养，过滤得重金属诱导后的胞外分泌液；

(2)三氯乙酸沉淀：在所述胞外分泌液中加入三氯乙酸溶液，其添加量为所述胞外分泌液体积的1/9～1/10，沉淀过夜，经离心弃上清液，收集沉淀，得到沉淀物；

(3)丙酮洗涤：用丙酮溶液对所述沉淀物洗涤，离心、弃上清，得到胞外分泌蛋白。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤(1)中，液态培养黄孢原毛平革菌至对数生长期中后期，加入镉离子溶液继续培养的时间为2h～4h，所述镉离子溶液的浓度为40μmol～50μmol。

3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于：所述步骤(2)中，离心弃上清液后，再向此上清液中加入三氯乙酸溶液，并再次经沉淀过夜、离心弃上清液后，最后收集全部沉淀，得到所述沉淀物。

4.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于：所述步骤(2)中，加入的三氯乙酸溶液质量-体积百分浓度为98％～100％。

5.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于：所述步骤(2)中，沉淀过夜的温度为0℃～4℃，离心时的温度和转速分别为0℃～4℃和10000rpm～12000rpm。

6.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于：所述步骤(3)中，丙酮溶液的体积分数为80％～100％，丙酮溶液经过低于-20℃预冷处理，并含0.07％～0.08％的β-巯基乙醇。

7.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于：所述步骤(3)中，用丙酮溶液对沉淀物洗涤两次，每次洗涤的温度低于-20℃，每次洗涤的时间为5h～10h。