[发明专利]壳聚糖基止血海绵及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医用材料领域，特别是一种具有凝血酶固定化作用的壳聚糖基止血海绵及其制备方法，并将其用于创伤或手术止血。

背景技术

止血是紧急医疗救治的一个重要步骤，病人手术治疗、日常生活中出现突发性创伤时，均需进行快速止血，在恶劣的战争环境和复杂突发事件中的战、创伤急救治疗时，实现快速有效的止血尤为重要。

壳聚糖是由甲壳素经脱乙酰化后制得的天然聚阳离子多糖，羧甲基壳聚糖是甲壳素经化学改性后得到的水溶性衍生物。壳聚糖、羧甲基壳聚糖均具有凝血、抑菌、促进创伤愈合、抑制瘢痕形成等多种作用，是一类生物相容性好、易生物降解、无免疫原性、无刺激性的多功能高分子生物材料，近年来在快速止血领域的应用日益广泛。

凝血酶属于丝氨酸蛋白水解酶类，是凝血过程中的重要酶。在血液凝固过程中，凝血酶的作用是催化血液中纤维蛋白原的裂解反应，使之成为纤维蛋白，加速血液凝固。同时，凝血酶激活凝血因子XIII，使纤维蛋白交联成网状结构，网络血液中的红细胞成为血凝块，阻止血液的进一步流失，完成凝血过程。凝血酶还具有促进损伤上皮细胞生长，促进伤口愈合的作用，因此，凝血酶被公认为是一种速效局部止血药，其止血作用在国内外临床治疗上已经得到广泛的应用。

单一壳聚糖基制备的止血海绵的止血效果不理想，愈创能力较弱，难以满足战创伤止血和临床快速止血的要求，如中国专利CN 101327344A。单一将凝血酶作为止血剂时，由于凝血酶的本质是蛋白质，稳定性较差，易变性失活，创伤紧急救治条件和野战环境常较为恶劣，难以提供理想的储存和酶催化环境，导致其止血应用范围受到极大限制。中国专利CN101053669A将水溶性壳聚糖衍生物的钠盐或钾盐溶解于水后，加入凝血酶，制成均匀胶体溶液，经真空冷冻干燥得到止血愈创海绵，增强了凝血效果。但它仍然存在凝血酶稳定性差，易失活的缺点，限制了该止血海绵的应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种具有凝血酶固定化作用的壳聚糖基止血海绵，提高凝血酶的稳定性，拓展凝血酶在止血领域中的应用。还提供一种通过复合应用止血材料制备壳聚糖基止血海绵的方法。

本发明解决其技术问题采用以下的技术方案：

本发明提供的是一种具有凝血酶固定化作用的壳聚糖基止血海绵，该海绵是由具有凝血酶固定化作用的壳聚糖基和止血剂制成的多孔状海绵。

所述的壳聚糖基为壳聚糖、羧甲基壳聚糖中的一种，其分子结构如下：

式中：R₁为H、CH₂COOH，R₂为H、COCH₃、CH₂COOH，n＝55～5500。

所述的壳聚糖为脱乙酰度40％～60％的甲壳素，黏均分子量为(0.1～10.0)×10⁵。所述的羧甲基壳聚糖为O-羧甲基壳聚糖，其分子结构中R₁＝CH₂COOH，R₂＝H，或N-羧甲基壳聚糖，其分子结构中R₁＝H，R₂＝CH₂COOH，或N，O-羧甲基壳聚糖，其分子结构中R₁＝CH₂COOH，R₂＝CH₂COOH，该羧甲基壳聚糖的脱乙酰度为40％～80％，黏均分子量为(0.1～8.0)×10⁵，羧甲基的取代度为0.2～0.8。

所述的止血剂为凝血酶、氯化钙、海藻酸钙、动物源胶原蛋白、类人胶原蛋白、止血中药中的一种，或多种。

所述的凝血酶为牛血或猪血中提取的凝血酶原，经激活而得的无菌冻干制品，将该凝血酶无菌冻干制品溶于pH为7.0的0.1mol·L^-1磷酸盐缓冲液，得到浓度为0.001％～5％的凝血酶溶液。壳聚糖基与凝血酶的重量比例为100∶0.1～20。

所述的动物源胶原蛋白是从动物的皮肤、软骨、肌膜或韧带组织中提取出的胶原蛋白，并制备成1％～5％的水溶液。

所述的类人胶原蛋白是将人体已知序列胶原蛋白的一段mRNA逆转录生成cDNA后，经过特定序列重复和修饰，转化于大肠杆菌中，并经过高密度发酵、分离提取及纯化而得，并制备成1％～5％的水溶液。所述特定序列是指对其α1肽链的Gly-X-Y进行改进，摒弃容易引起免疫反应的色氨酸等氨基酸残基。

所述的动物源胶原蛋白或类人胶原蛋白与壳聚糖基的重量比例是1～40∶1。