[发明专利]天然芸苔素内酯类似物的应用

说明书

本发明提供了提取自植物的芸苔素内酯类似物的提取及其应用，包括促进植物生长、抗低温和耐高盐等方面的应用。另外，本发明还提供了包含该芸苔素内酯类似物的农用组合物。

技术领域

本发明属于农用化学技术领域，具体而言，本发明涉及提取自植物的芸苔素内酯类似物及其应用，包括促进植物生长、抗低温和耐高盐等方面的应用。

背景技术

芸苔素内酯是国际上公认为活性最高的高效、广谱、无毒的植物生长调节剂，生理效益比已经发现的另外五大类植物激素高，而被称为世界第六大类植物激素。芸苔素内酯广泛存在于被子植物、裸子植物和某些低等植物中，从在植物体内的分布来看，存在于根、茎、叶、花粉、雌蕊、果实和种子中，如油菜花粉中含有较丰富的芸苔素内酯。

化学合成的芸苔素内酯，如中国专利申请CN1217337A、CN1217338A等所述的，虽然产品较为均一，但是活性成分单一，长期施用效果通常不如天然芸苔素内酯好，这在中国国内已经广泛使用的28-表高芸苔素内酯上表现得尤为突出。

从植物(如，花粉)或其他天然来源(如，蜂蜡)中提取的芸苔素内酯，其中通常含有多种芸苔素内酯结构类似物，其作为一种绿色的生产资料，其推广使用更容易为国内外用户所推崇，但是由于提取中工艺的限制，容易产生产品质量不稳定的情况；如果进一步提纯，则制备成本上升较大，不利于产业化实施，因而阻碍了人们进一步大量纯化，并阻碍了人们去研究其中各芸苔素内酯类似物是否具有芸苔素内酯的活性。例如，Zhu，W.M.等(Synthetic Communications，32(9)，1385-1391)和Suksamararn，A.等(Tetrahedron，58，6033-6037)合成了一些化合物，但仅仅被当成昆虫的蜕皮激素类似物而只启示其的昆虫激素应用。

本发明人通过长期而艰苦的努力，摸索出了从植物中提取(纯化)芸苔素内酯类似物的稳定流程，精心研究了其中的各种提取溶剂，尽管其中需要一定的提纯过程，但是只需要一次提取过程，最终可以收集到多种分离的高纯度的天然芸苔素内酯类似物，因而摊薄了提纯的成本，有利于产业化推广实施；这些分离的天然芸苔素内酯类似物可以单独施用，也可以配比混和施用，因而产品质量稳定而容易控制。在获得了大量分离的高纯度的天然芸苔素内酯类似物的基础上，本发明人进一步研究，令人意外地发现了，这些天然芸苔素内酯类似物在植物生物活性增加、抗低温和耐高盐等方面均有效用，甚至在一定条件下效果、活性高于现有化学合成的芸苔素内酯类产品。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供了新的天然芸苔素内酯类似物的提取方法和应用，包括促进植物发育、提高植物发芽率、增加植物抗低温性和/或增加植物耐高盐性的应用。另外，本发明还提供了配比稳定的农用组合物，其中包含天然芸苔素内酯类似物。

具体而言，在第一方面，本发明提供了天然芸苔素内酯类似物的提取方法，其包括，

(1)用80～100％(V/V)乙醇水溶液提取破碎的油菜花粉，固液分离后保留滤液(任选其中滤液进一步浓缩)，获得醇溶性提取液；

(2)将醇溶性提取液与0～60％(V/V)乙醇水溶液混合，然后加入乙酸乙酯萃取，保留乙酸乙酯层并加入酯酶进行不完全反应，然后干燥，获得酯溶性提取物；

(3)酯溶性提取物上样于硅胶色谱柱，用甲醇和乙酸乙酯的混和液洗脱，收集含有天然芸苔素内酯类似物的洗脱液，干燥并溶解于甲醇中，获得硅胶柱纯化液；和

(4)将硅胶柱纯化液上样于C18反相色谱柱，用乙腈和水的混和液洗脱，分别收集含有如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物的洗脱液。

在本文中，“天然”指的是从所限定的物质是从天然来源(如花粉、蜂蜡等)中提取的。在本发明的具体实施方式中，所提供的芸苔素内酯类似物是从油菜花粉中。当然，由于已经解析了这些天然芸苔素内酯类似物，因此它们不限于从天然来源(如花粉、蜂蜡等)中提取，也可以是化学合成的。