[发明专利]用于组织修复和生物人造组织工程的细胞片及其制备方法

权利要求书

1.来源于干细胞的细胞片，包含处理的干细胞和所述处理的干细胞自分泌的并包埋所述处理的干细胞的细胞外基质(ECM)。

2.如权利要求1所述的细胞片，其中所述细胞片包含选自以下的化合物：胶原蛋白、蛋白聚糖、糖蛋白或以上的任意组合，优选包含胶原蛋白、蛋白聚糖和糖蛋白。

3.如权利要求2所述的细胞片，其中所述胶原蛋白选自I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、II型胶原蛋白或以上的任意组合；所述蛋白聚糖(PG)选自聚集蛋白聚糖、核心蛋白聚糖、二聚糖或以上的任意组合；所述糖蛋白选自弹性蛋白、软骨寡聚基质蛋白(COMP)、腱生蛋白C或以上的任意组合。

4.如权利要求2或3所述的细胞片，包含占所述细胞片干重的40-90％w/w的胶原蛋白、0.5-30％w/w的PG和1-30％w/w的糖蛋白。

5.如权利要求2-4中任一项所述的细胞片，其中所述胶原蛋白包含占所述胶原蛋白总重量的70-98％w/w的I型胶原蛋白、1-15％w/w的III型胶原蛋白和1-5％w/w的II型胶原蛋白。

6.如权利要求1-5中任一项所述的细胞片，其中所述细胞片被进一步脱细胞化而成为无细胞片。

7.如权利要求1-6中任一项所述的细胞片，其中所述干细胞是成体干细胞；或者其中所述干细胞分离自肌腱、骨髓、脂肪组织、牙髓或以上的任意组合。

8.如权利要求1-7中任一项所述的细胞片，其中所述干细胞分离自动物组织或人类组织，或者其中所述干细胞是自体的或同种异体的。

9.如权利要求1-8中任一项所述的细胞片，其中对所述细胞片进行进一步的化学、生物学、遗传学、生物机械学和/或生物物理学方面的修饰和/或添加，使得所述修饰能调节所述细胞或细胞片的程度和活性。

10.如权利要求1-9中任一项所述的细胞片，其中所述细胞片包含直径为5-500nm的胶原蛋白原纤维。

11.如权利要求1-10中任一项所述的细胞片，其中所述细胞片的极限应力为1-10N/mm²。

12.制备权利要求1-11中任一项所述细胞片的方法，包括：

(a)从新鲜组织获得干细胞或从液氮中解冻干细胞；

(b)扩增所述干细胞并使所述细胞生长至汇合；

(c)用生物因子或导致所述细胞片成熟或导致产生生物因子的因子处理所述干细胞，从而在体外诱导干细胞分化、产生细胞外基质并形成细胞片，其中所述导致产生的生物因子包括用于处理干细胞的生物因子。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述生物因子包含转化生长因子家族(TGF)和抗坏血酸；和/或生长分化因子/骨形态发生蛋白(GDF/BMP)家族和抗坏血酸；和/或结缔组织生长因子(CTGF)和抗坏血酸。

14.如权利要求12所述的方法，其中所述导致产生生物因子的因子是

诱导所述干细胞产生所述生物因子的化学试剂；和/或

诱导所述干细胞产生所述生物因子的生物试剂；和/或

诱导所述干细胞过表达所述生物因子的分子生物学手段；和/或

诱导所述干细胞产生所述生物因子的体外机械负荷；和/或

诱导所述干细胞产生所述生物因子的生物物理学方法。

15.权利要求1-11中任一项所述的细胞片在组织修复中的用途。

16.如权利要求15所述的用途，其中需要修复的组织是患有疾病或处于疾病状态的肌腱和韧带、骨、软骨、肌肉或皮肤。

17.如权利要求16所述的用途，其中所述肌腱和韧带疾病状态或疾病是肌腱破裂、韧带破裂、ACL重建、肩袖损伤、肌腱病或前交叉韧带(ACL)重建中移除髌骨-髌腱-骨移植物后而造成的髌腱的窗样损伤；和/或

所述骨疾病状态或疾病是骨折；和/或

所述软骨疾病状态或疾病是骨关节炎或骨-软骨缺损；和/或

所述肌肉疾病状态或疾病是肌肉撕裂；和/或

所述皮肤疾病状态或疾病是创伤或烧伤。

18.如权利要求1-11中任一项所述的细胞片在生物人造组织工程中的用途。