[发明专利]survivin基因叶酸受体靶向的新型脂质体无效

专利信息
申请号: 201210015244.8 申请日: 2012-01-17
公开(公告)号: CN102676517A 公开(公告)日: 2012-09-19
发明(设计)人: 王天有;唐锁勤 申请(专利权)人: 首都儿科研究所;中国人民解放军总医院
主分类号: C12N15/113 分类号: C12N15/113;C12N15/88;A61K9/127;A61K48/00;A61P35/02
代理公司: 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 代理人: 李志东
地址: 100020*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: survivin 基因 叶酸 受体 靶向 新型 脂质体
【权利要求书】:

1.一种survivin基因的siRNA,其特征在于:所述siRNA的正义链为SEQID NO:1,反义链为SEQ ID NO:2。

2.survivin基因叶酸受体靶向的新型脂质体,其特征在于:该脂质体包裹如权利要求1所述的survivin基因的siRNA。

3.权利要求2所述的脂质体的制备方法,包括以下步骤:(1)将二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、1,2-二油酸-3-二甲基酰胺丙烷、聚乙二醇溶于无水乙醇中,再加入不同剂量的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺,调溶液的pH,然后,将柠檬酸溶液和乙醇加入到该溶液中,形成脂溶液;(2)在柠檬酸溶液和乙醇溶液中制备siRNA;(3)加热上述(1)、(2)得到的两种溶液混合,得到叶酸-PEG-脂质体-survivin siRNA混合物;(4)将(2)中的混合物过滤,然后在柠檬酸溶液中透析,除去多余的乙醇,并进一步在HBS中透析,除去柠檬酸缓冲液,中和DODAP,并释放任何与小泡膜表面相关的siRNA。最后,包含siRNA的脂质体通过琼脂糖凝胶柱从自由siRNA中被分离出来。

4.权利要求3所述的脂质体的制备方法,其特征在于:所述的pH为4。

5.权利要求3所述的脂质体的制备方法,其特征在于:所述的柠檬酸溶液的浓度为300mM,乙醇溶液的浓度为40%(v/v)。

6.权利要求3所述的脂质体的制备方法,其特征在于:所述的加热温度为65℃。

7.权利要求3所述的脂质体的制备方法,其特征在于:所述的混合比例为150μg siRNA/μmol液体。

8.权利要求1所述的siRNA或权利要求2所述的脂质体在制备用于治疗急性髓细胞白血病的药物中的用途。 

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