[发明专利]一种疫苗佐剂CCL28及制备方法和应用

权利要求书

1.一种分离的基因，其序列为SEQ ID 1所示的核苷酸序列。

2.一种表达并纯化的蛋白质，其序列为SEQ ID 2所示的氨基酸序列。

3.一种分离的基因，其序列为SEQ ID 3所示的核苷酸序列。

4.一种表达并纯化的蛋白质，其序列为SEQ ID 4所示的氨基酸序列。

5.权利要求1至4所述的一种疫苗佐剂CCL28的制备方法，其步骤是：

A、从免疫接种受体分离得到脾脏细胞或外周血单核细胞，并抽提其总mRNA；

B、通过RT-PCR技术，将所得mRNA逆转录为单链cDNA；

C、设计CCL28特异性扩增的PCR引物对，并通过引物对在基因两端分别引入合适酶切位点，然后通过PCR扩增得到CCL28基因片段；所述的引物对为：

小鼠：

正义链引物：5′-GATGAATTCATGCAGCAAGCAGGGCTCACACTC-3′

反义链引物：5′-TTACTCGAGCTAACGAGAGGCTTCGTGCCTGTG-3′

人：

正义链引物：5′-ATGAATTCATGCAGCAGAGAGGACTCGC-3′

反义链引物：5′-CGCTCGAGCTAATAAGGAGTTTTATGGC-3′

D、对CCL28基因片段和pcDNA3.1(+)，分别进行双酶切，酶切得到的粘性末端片段通过T4连接酶连接，得到重组表达质粒；

E、将连接产物转化大肠杆菌DH5α，然后将大肠杆菌在LB培养基中大量扩增培养，最后从培养好的大肠杆菌提取重组质粒；

F、重组质粒序列测定后，序列正确的重组质粒即为本发明所述的基因型佐剂CCL28-pcDNA3.1。

6.权利要求1至5中所述的一种疫苗佐剂CCL28在肌肉注射型疫苗中的应用。

7.权利要求1至5中所述的一种疫苗佐剂CCL28在滴鼻免疫型疫苗中的应用。