[发明专利]鉴定优质抗虫杂交棉中棉所70品种真实性和／或品种纯度的SSR分子标记方法

权利要求书

1.一种鉴定优质抗虫杂交棉 “中棉所70”种子真实性和／或品种纯度的SSR标记方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）提取棉花杂交种“中棉所70”及其亲本种子或幼苗叶片基因组DNA；

（2）以第（1）步提取的基因组DNA为模板，用SSR引物CGR5390、BNL1552、CGR5111和CIR246中的一个或多个引物，进行PCR扩增，其中，4个SSR特征引物碱基序列为： 

CGR5390引物其正向序列如SEQ ID No.1所示，反向序列如SEQ ID No.2所示；BNL1552引物其正向序列如SEQ ID No.所示，反向序列如SEQ ID No.4所示，CGR5111引物其正向序列如SEQ ID No.5所示，反向序列如SEQ ID No.6所示；CIR246引物序列如SEQ ID No.7所示，反向序列如SEQ ID No.8所示；

（3）对扩增产物进行凝胶电泳；

（4）对电泳结果进行分析，如果同时具有父母双亲本特异条带的种子或单株鉴定为真正的杂交种，缺少其中的任意一个条带均被视为假杂种，其中，4个SSR引物产生的特异标记带大小为：

SSR引物CGR5390产生的母本特异标记CGR5390₂₀₅，条带大小为205bp，产生的父本特异标记CGR5390₁₉₀，条带大小为190bp；

SSR引物BNL1552产生的母本特异标记BNL1552₁₇₅，条带大小为175bp，产生的父本特异标记BNL1552₁₈₀，条带大小为180bp；

SSR引物CGR5111产生的母本特异标记CGR5111₁₃₅，条带大小为135bp，产生的父本特异标记CGR5111₁₂₈，条带大小为128bp；

SSR引物CIR246产生的母本特异标记CIR246₂₀₀，条带大小为200bp，产生的父本特异标记CIR246₁₉₀，条带大小为190bp。

2.根据权利要求1所述鉴定优质抗虫杂交棉 “中棉所70” 种子真实性和／或品种纯度的SSR标记方法，其特征在于，第（4）步还计算种子遗传纯度，具体计算方法如下：种子遗传纯度＝检测到的与标准中棉所70F₁带型相同的个体数/检测总数×100%。

3.据权利要求1所述鉴定优质抗虫杂交棉 “中棉所70” 种子真实性和／或品种纯度的SSR标记方法，其特征在于：第（2）步中，以第（1）步提取的基因组DNA为模板，用SSR引物CGR5390、BNL1552、CGR5111和CIR246中的一个引物，进行PCR扩增。

4.根据权利要求1所述鉴定优质抗虫杂交棉 “中棉所70” 种子真实性和／或品种纯度的SSR标记方法，其特征在于：第（2）步中， PCR扩增反应体系为：反应体系为10μ1，其中超纯水6.40μ1，10×Buffer 1.0μ1，10mM dNTPs 0.50μ1，10μM正向引物0.50μ1，10μM反向引物0.50μ1，30ng/μ1模板DNA1.0μ1 ，5U/μ1Taq DNA聚合酶0.10μ1；反应程序为：94℃预变性45s，1个循环；94℃变性30s，57℃退火45s，72℃延伸1min，29个循环；94℃变性60s，57℃退火45s，72℃延伸2min，一个循环；4℃保存待用。