[发明专利]定量检测血浆肾素用磁微粒化学发光试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医用诊断试剂技术领域，尤其是涉及一种定量检测血浆肾素用磁微粒化学发光试剂盒。

背景技术

肾素（renin）是肾小球旁器、球旁细胞释放的一种蛋白水解酶。肾素经肾静脉进入血液，能催化血浆中的血管紧张素原（在α2球蛋白中）转变成血管紧张素Ⅰ（10肽），血液和肺组织中的转换酶使血管紧张素Ⅰ降解为血管紧张素Ⅱ（8肽），后者可被氨基肽酶水解为血管紧张素Ⅲ（7肽）。这三种血管紧张素均有生物活性，其中血管紧张素Ⅱ、Ⅲ的生物活性较强，而后者在血中的浓度较低，故以血管紧张素Ⅱ的生物活性最强。血管紧张素原和转换酶等经常存在于血浆中，肾素的释放是决定血浆中血管紧张素浓度的关键性条件。

血浆肾素含量的检测，可用于诊断由于肾动脉狭窄导致的高血压或肾血管性高血压，帮助临床医生决定是否进行肾血管的影像学研究，诊断原发性醛固酮增多症，以及为原发性高血压病人心血管系统的并发症的发生提供有效的信息等。另外对于指导用药和治疗效果的评价有很重要的意义，例如，对于一些肾上腺功能低下并采用类固醇激素替代治疗的病人，当治疗效果充足时，肾素水平正常，当治疗效果不足时，肾素水平过高。

肾素活性-血管紧张素II-醛固酮，在临床应用中，通常被称为高血压三项。目前对于肾素含量的检测，常通过检测血浆中血管紧张素I的浓度，来间接衡量肾素含量，称之为肾素活性。肾素活性的测定是由于血浆样本内的肾素在一定PH值和反应时间内，将样本中内源性的血管紧张素原转化为血管紧张素I，采用竞争法检测样本中的血管紧张素I的浓度，根据单位时间内生成血管紧张素I浓度的不同，来计算血浆样本的肾素活性，肾素活性的这种测定方法对标本处理、环境条件、PH值、时间等都要求极为苛刻，室内及室间重复性差。对于直接测定肾素浓度的方法目前还鲜有报道，特别是采用均相的磁微粒发光技术，国内外尚未有该技术的建立。

发明内容

本发明的目的在于提供一种定量检测血浆肾素用磁微粒化学发光试剂盒，该试剂盒直接用抗肾素抗体作为包被和标记，测定血浆中的肾素含量，实现了肾素含量的直接评价。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的定量检测血浆肾素用磁微粒化学发光试剂盒，包括偶联有抗肾素抗体的磁微粒混悬液、校准品、辣根过氧化物酶标记的抗肾素单克隆抗体、化学发光底物A、化学发光底物B以及洗液。

所述磁微粒混悬液中的抗肾素抗体为小鼠抗肾素单克隆抗体，磁微粒为表面含有羧基的活性基团。

所述校准品是以0.05M的Tris-NaCl、1%的EDTA-Na2、和2%的牛血清白蛋白组成pH7.4的缓冲液为基质，加入肾素纯品配制而成，校准品形态为液态且具有良好的稳定性。

辣根过氧化物酶标记的抗肾素单克隆抗体为大鼠抗肾素单克隆抗体，该抗肾素单克隆抗体是以0.01M的PBS和1%酪蛋白作为缓冲液基质，工作浓度为1:1000。

所述化学发光底物A由Luminol 0.15mM、羟基香豆素0.59 mM、没食子酸0.35 mM、Tris-HCl缓冲液0.2M组成，最后调pH7.4；化学发光底物B 由0.2M乙酸-乙酸盐缓冲液、维生素C 0.12 mM、氨基酸氧化酶0.85 mM组成，最后调pH7.4。

本发明的优点在于采用双抗体夹心法联合磁微粒化学发光技术，直接采用抗肾素抗体作为包被和标记，测定血浆中的直接肾素含量，实现了肾素含量的直接评价；本发明试剂盒实现了操作的简便性和自动化性，具有检测时间短、灵敏度高、稳定性好、结果准确、变异性小的特点。

附图说明

    图1是本发明试剂盒检测血浆肾素的校准曲线图。

 

具体实施方式

本发明所述的定量检测血浆肾素用磁微粒化学发光试剂盒，包括偶联有抗肾素抗体的磁微粒混悬液、校准品、辣根过氧化物酶标记的抗肾素单克隆抗体、化学发光底物A、化学发光底物B以及洗液。

偶联有抗肾素抗体的磁微粒混悬液中的抗肾素抗体为鼠抗肾素单克隆抗体，磁微粒为表面含有羧基的活性基团；采用双抗体夹心法，所用的两株配对抗体均为鼠抗肾素单克隆抗体，因此具有优异的特异性；磁微粒混悬液采用氨基戊二醛法制备，通过化学键联结磁性微粒和肾素抗体，肾素抗体的浓度控制在0.30ug/人份，以0.01M的PBS和1%BSA作为缓冲体系和保护体系；

所用的校准品是以0.05M的Tris-NaCl、1%的EDTA-Na2、和2%的牛血清白蛋白组成pH7.4的缓冲液为基质，加入肾素纯品配制而成，校准品形态为液态。