[发明专利]一种检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法

权利要求书

1. 一种检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法，其首先将样品垫、结合垫、包被有检测线和质控线的层析膜、吸水垫依次相互交错粘贴在底板上，构成免疫层析试纸条，然后向样品垫中滴加血液样本进行检测，其特征在于：所述结合垫上结合有过敏原-生物素-亲合素-乳胶微球，所述方法利用血液样本中的过敏原特异性IgE抗体能够与过敏原-生物素-亲合素-乳胶微球结合形成结合物，以及所形成的结合物能够在检测线处被捕获而呈现色带来实现对过敏原特异性IgE抗体的定性检测。

2. 根据权利要求1所述的检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法，其特征在于：所述的过敏原-生物素-亲合素-乳胶微球通过如下方法制备：首先将过敏原与生物素连接形成过敏原-生物素，将亲合素与乳胶微球连接形成亲合素-乳胶微球，然后再将所形成的过敏原-生物素与所形成的亲合素-乳胶微球连接，即得所述的过敏原-生物素-亲合素-乳胶微球。

3. 根据权利要求2所述的检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法，其特征在于：所述的过敏原-生物素-亲合素-乳胶微球的具体制备过程如下：

①将过敏原溶于磷酸盐缓冲液中，将生物素溶于去离子水中，然后将生物素的水溶液滴加至过敏原的磷酸盐缓冲液中，在室温下搅拌，得到含有过敏原-生物素的溶液；

②将亲合素溶液溶于脂肪酸甲酯磺酸盐缓冲液中，将乳胶微球储存液剧烈震荡，取出微球于离心管中，离心，除去上清，加入脂肪酸甲酯磺酸盐缓冲液，剧烈震荡，加入溶有亲合素的脂肪酸甲酯磺酸盐缓冲液和新鲜配制的碳二亚胺溶液，剧烈震荡，使混合均匀，在室温暗室孵育20～40分钟，加入吐温-20，离心，除去上清，加入十二烷基硫酸钠水溶液溶解微球，剧烈震荡，离心，除去上清，加入磷酸盐缓冲液溶解微球，剧烈震荡，得含有亲合素-乳胶微球的溶液；

③将步骤①制得的含有过敏原-生物素的溶液加入步骤②制得的含有亲合素-乳胶微球的溶液中，轻轻搅拌直至微球全部悬浮起来，然后在室温下持续搅拌10～15小时，即得含有过敏原-生物素-亲合素-乳胶微球的溶液。

4. 根据权利要求4所述的检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法，其特征在于：通过喷涂所述含有过敏原-生物素-亲合素-乳胶微球的溶液使过敏原-生物素-亲合素-乳胶微球结合到结合垫上。

5. 根据权利要求1至4中任一项权利要求所述的检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法，其特征在于：所述的样品垫上包被有抗红细胞抗体。

6. 根据权利要求1至4中任一项权利要求所述的检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法，其特征在于：所述的检测线通过包被鼠抗人IgE单克隆抗体形成。

7. 根据权利要求1至4中任一项权利要求所述的检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法，其特征在于：所述的质控线通过包被羊抗人IgE的多克隆抗体形成。

8. 根据权利要求1至4中任一项权利要求所述的检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法 ，其特征在于：所述的层析膜为硝基纤维素膜。

9. 根据权利要求1至4中任一项权利要求所述的检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法，其特征在于：所述的乳胶微球为聚苯乙烯微球。

10. 生物素-亲合素放大系统在免疫层析法中的应用。