[发明专利]高产量分离包括小靶核酸在内的靶核酸的方法

权利要求书

1.一种从样品分离包括小靶核酸在内的靶核酸的方法，所述方法包括至少下列步骤：

a)通过将所述样品经过柱来使至少一部分包括小靶核酸在内的靶核酸结合所述柱中含有的核酸结合固相，

b)在所述靶核酸结合所述固相时对核酸结合固相进行酶和/或化学处理，

c)收集所述步骤b)处理中从所述固相释放的至少一部分小靶核酸作为流出物，

d)将含小靶核酸的混合有回收溶液的所述流出物接触核酸结合固相，用以将所含小靶核酸结合所述核酸结合固相，

e)可选进行洗脱。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，用于步骤a)的所述核酸结合固相是膜。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤c)中回收溶液通过所述柱且收集含小靶核酸和所述回收溶液的流出物并用于步骤d)，优选用于使流出物所含的小靶核酸重结合步骤a)所用的核酸结合固相。

4.一种从样品分离包括小靶核酸在内的靶核酸的方法，所述方法包括至少下列步骤：

a)通过将所述样品经过核酸结合膜来使至少一部分包括小靶核酸在内的靶核酸结合所述膜，

b)在所述靶核酸结合所述膜时对膜进行涉及水溶液的处理，

c)使回收溶液通过所述膜并收集含小靶核酸的流出物，

d)使所述流出物通过步骤a)的膜以将所含小靶核酸重结合所述膜，

e)可选从所述膜洗脱包括小核酸在内的靶核酸。

5.如权利要求1-4中一项或多项所述的方法，其特征在于，所述酶和/或化学处理在步骤b)中进行，包含使用水溶液且选自核酸酶消化步骤、蛋白消化步骤、脂酶消化步骤和靶核酸修饰步骤。

6.如权利要求1-5中一项或多项所述的方法，其特征在于，所述步骤b)中进行的处理涉及引起至少部分靶核酸，尤其是小靶核酸从所述核酸结合固相释放的条件。

7.如权利要求1-6中一项或多项所述的方法，其特征在于，所述回收溶液具有一种或多种下列特征：

a)提供适于使小核酸结合步骤d)所用的核酸结合固相的条件；

b)就结合小核酸而言，提供比步骤a)所用的结合条件更强的结合条件；

c)提供适于使小RNA结合步骤d)所用的核酸结合固相的条件；

d)提供适于使小DNA结合步骤d)所用的核酸结合固相的条件；

e)包含至少一种离液剂和/或至少一种醇；和/或

f)包含至少一种浓度为0,1-6M，优选0,5-6M的离液剂和/或至少一种浓度为至少50%v/v的选自乙醇和异丙醇的醇。

和/或

其中用于步骤d)的结合条件具有一种或多种下列特征：

a)适于使小核酸结合步骤d)所用的核酸结合固相；

b)就结合小核酸而言，提供比步骤a)所用的结合条件更强的结合条件；

c)适于使小RNA结合步骤d)所用的核酸结合固相；

d)适于使小DNA结合步骤d)所用的核酸结合固相；

g)包含至少一种离液剂和/或至少一种醇；和/或

h)包含至少一种浓度为0,1-6M，优选0,5-6M的离液剂和/或至少一种浓度为至少50%v/v的选自乙醇和异丙醇的醇。

8.如权利要求1-7中一项或多项所述的方法，其特征在于，所述步骤b)中，若所述靶核酸是RNA则进行DNA酶消化，若所述靶核酸是DNA则进行RNA酶消化。

9.如权利要求1-8中一项或多项所述的方法，其特征在于，所述步骤a)中的结合在具有一种或多种下列特征的条件下进行：

a)所述条件适于使总核酸结合所述核酸结合固相；

b)所述条件适于使包括小RNA在内的总RNA结合所述核酸结合固相；

c)所述条件适于使包括小DNA在内的总DNA结合所述核酸结合固相；和/或

d)在至少一种离液剂和/或至少一种醇存在下发生结合。

10.如前述权利要求1-9中一项或多项所述的方法，其特征在于，所述样品在步骤a)之前或之中裂解或加工。

11.如前述权利要求1-10中一项或多项所述的方法，其特征在于，所述样品包含小核酸和/或经降解的核酸。