[发明专利]抗铜绿假单胞菌的I血清型脂多糖的抗体

说明书

技术领域

本发明涉及抗铜绿假单胞菌的I血清型脂多糖的抗体及其应用。更具体地，本发明涉及特异性地结合铜绿假单胞菌菌株的I血清型脂多糖的抗体，以及包含任何所述抗体的药物组合物、用于铜绿假单胞菌感染的诊断剂和铜绿假单胞菌检测试剂盒。

背景技术

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种广泛且通常分布在自然环境中如土壤和水中的革兰氏阴性需氧杆菌。铜绿假单胞菌是一种无毒性细菌，其对于健康受试者通常是不致病的，所述健康受试者对于铜绿假单胞菌具有中等抗体效价和足够的免疫功能。但是，一旦体弱患者感染了铜绿假单胞菌，铜绿假单胞菌可导致严重的症状，所述症状可导致所述患者死亡。为此，铜绿假单胞菌作为医院感染和机会感染的主要病原菌已引起关注，因此铜绿假单胞菌感染的预防和治疗在医学领域已是重要的问题。

对于铜绿假单胞菌感染的预防或治疗，主要使用抗生素或合成抗细菌剂。但是，铜绿假单胞菌对这些药物产生抗性，因此这些药物在许多情况下无法提供足够的治疗效果。特别地，使用抗生素等治疗耐多药铜绿假单胞菌(MDRP)的感染很困难，并且有限制。为此，作为其替代方法，已开始使用免疫球蛋白制剂的治疗。

同时，也检验了使用抗铜绿假单胞菌的抗体预防或治疗铜绿假单胞菌感染。例如，已开发了抗体，其各自特异性地结合具体血清型铜绿假单胞菌菌株上（专利文献1至5，非专利文献1和2）。但是，目前开发的抗铜绿假单胞菌的抗体在铜绿假单胞菌感染的预防或治疗中尚未提供足够的效果。

引文列表

专利文献

专利文献1日本未审查专利申请公开文本No.Hei 6-178688

专利文献2日本未审查专利申请公开文本No.Hei 6-178689

专利文献3日本未审查专利申请公开文本No.Hei 7-327677

专利文献4国际公开文本No.WO 2004/101622

专利文献5国际公开文本No.WO 2006/084758

非专利文献

非专利文献1 The Journal of Infectious Diseases,152,6,1985,1290-1299。

非专利文献2 Journal of General Microbiology,133,1987,3581-3590。

发明内容

技术问题

考虑到上述情况而作出本发明，并且本发明的目的是提供一种具有对铜绿假单胞菌的优良抗细菌活性的新抗体。本发明的一个主要目的是提供一种对铜绿假单胞菌具有优良的抗细菌活性并且可用作多克隆抗体制剂的组分的新抗体。作为这种新抗体的一个方面，本发明的目的是提供一种特异性地结合铜绿假单胞菌菌株的I血清型脂多糖的抗体。

技术方案

为达到上述目的，本发明人采用了以下方法。首先，从患有慢性铜绿假单胞菌肺部感染的囊肿性纤维化患者和健康志愿者中采集血液样本。将具有高比例的对于脂多糖（下文中有时简称为“LPS”）具有特异性的成浆细胞的供体样本通过以下方法进行鉴定：(1)测定在循环血液中成浆细胞和浆细胞的量的FACS分析；(2)测定在循环血液中产生对具体LPS抗原具有特异性的抗体的细胞的量的ELISPOT分析；以及(3)测定对具体LPS抗原具有特异性的免疫球蛋白存在或不存在的ELISA分析。然后，从由此鉴定的供体样本制备识别LPS的抗体。

具体地，通过染色CD19、CD38、λ轻链和死细胞来选择活成浆细胞。在选出的成浆细胞上，来源于相同的B细胞的编码重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的DNA序列通过两步PCR——包括多重重叠延伸RT-PCR和随后的巢式PCR——而配对(图1)。随后，将扩增DNA插入到筛选载体中，然后转化到大肠杆菌（Escherichia coli）中。从所述大肠杆菌中纯化出扩增载体集合。将所得的抗体库在动物培养细胞中表达。通过ELISA筛选编码可结合纯化的LPS分子的抗体的克隆体，并选择LPS特异性克隆。然后，测定所选克隆的碱基序列。其后，检测由如此得到的克隆编码的抗体的多种活性、其血清型特异性和抗原表位。

结果，发现了鉴定的抗体可结合铜绿假单胞菌的I血清型LPS，且在体外和体内具有优良的抗细菌活性。

具体地，本发明涉及可结合铜绿假单胞菌的I血清型LPS的抗体，展现出优良的抗细菌活性。本发明还涉及所述抗体的用途。更具体地，本发明提供了：