[发明专利]一种快速检测杜冷丁的胶体金检测试剂盒及其制备

说明书

技术领域

本发明涉及一种胶体金检测试剂盒以及制备工艺，具体涉及杜冷丁胶体金检测试剂盒以及制备工艺。

背景技术

杜冷丁的学名叫哌替啶，又叫作唛啶、地美露，是人工合成的吗啡代用品，其盐酸盐为白色结晶状粉末，能溶于水和乙醇，一般制成针剂，主要用于疼痛、心源性哮喘、内脏绞痛等适应症。杜冷丁对人体的作用机理与吗啡相似，欣快、镇痛作用较吗啡小，但连续使用1-2周便可产生依赖，一旦停止后则会产生相似于吗啡戒断后的戒断综合症，主要表现为精神萎靡不振、全身不适、流泪流涕、呕吐、腹泻、失眠，严重者也会产生虚脱。杜冷丁的滥用是我国当前所面临的毒品问题之一，已被列入国家麻醉药品予以严格管制。

目前，杜冷丁的检测方法中运用最广泛的主要是气相色谱GC、高效液相色谱HPLC、气相质谱GC/MS或GC/FID分析的方法，这些检测方法需要专业人员操作，且复杂费时，成本高，仅适用于杜冷丁的确认检测，却不能达到国内缉毒、查毒、禁毒行动所需的方便、快速、灵敏的要求。至今，国内尚没有涉及杜冷丁快速检测试剂的相关专利。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的缺陷，从提高检测灵敏度出发，提供一种既方便又快速的杜冷丁胶体金快速检测试剂盒及其制备方法。

本发明的一方面，提供一种杜冷丁胶体金检测试剂盒，包括试剂条，试剂条从加样端开始依次为滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，所述免疫胶体金纸片为包被有胶体金标记的抗杜冷丁单克隆抗体的玻璃纤维垫片，免疫硝酸纤维素膜设有检测线(T线)和质控线(C线)，检测线上喷点有杜冷丁-载体复合物，质控线上喷点有羊抗鼠IgG。

较佳的，所述胶体金标记的抗杜冷丁单克隆抗体中，胶体金为粒径39-42nm的球形颗粒。

本发明的第二方面还提供了上述杜冷丁胶体金检测试剂盒的制备方法，包括下列步骤：

1)用两步还原法制备平均粒径为39-42nm的胶体金；

2)采用步骤1制得的胶体金标记抗杜冷丁单克隆抗体获得免疫胶体金；

3)采用喷金缓冲液稀释步骤2)的免疫胶体金获得免疫胶体金溶液，用免疫胶体金溶液喷涂经预处理的玻璃纤维垫片，制得免疫胶体金纸片；

4)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷点杜冷丁-载体复合物及羊抗鼠IgG，制得免疫硝酸纤维素膜；

5)将滤样纸、步骤3制备的免疫胶体金纸片、步骤4制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得检测试剂条；最后将检测试剂条装入塑料盒制得检测试剂盒。

步骤1)所述两步还原法制备平均粒径为39-42nm的胶体金具体包括下列步骤：

a)第一次还原氯金酸溶液：

制备浓度为0.0004-0.0005mol/L的HAuCl₄水溶液，加热煮沸20-30分钟，之后边搅拌边加入柠檬酸三钠水溶液，HAuCl₄与柠檬酸三钠的摩尔比为1∶(8-9)，超声振荡2-3分钟后冷却至室温，既制得14～16nm粒径的胶体金原溶液。

b)第二次还原氯金酸溶液：

将第一步制得的胶体金原溶液放置于4.0-4.5℃恒温冰浴中稳定温度，随后按胶体金原溶液与HAuCl₄水溶液体积比1∶(1.9-2.0)加入4.0-4.5℃的0.003-0.004mol/L HAuCl₄水溶液，随后立即边搅拌边滴加4.0-4.5℃的抗坏血酸与PVP(聚乙烯醇吡咯烷酮)的混合水溶液，加入的抗坏血酸与本步骤加入的HAuCl₄的摩尔比为(25-26)∶1，加入的PVP与本步骤加入的HAuCl₄的重量比为1∶(2.0-2.1)，反应中保持温度恒定，搅拌至反应完全，溶液呈透明的酒红色，既制得39-42nm粒径的胶体金溶液。

两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸水。

步骤a)中，加入柠檬酸三钠水溶液的浓度为0.01-0.02mol/L。

步骤a)中，超声震荡的频率为20-30KHZ。

步骤b)中，抗坏血酸与PVP的混合水溶液的滴加速度为1-2滴/s。

步骤b)中，所述抗坏血酸与PVP的混合双蒸水水溶液中，抗坏血酸的浓度为0.017-0.019mol/L，PVP的浓度为0.137-0.139g/L。

步骤b)中，搅拌反应约为50-70分钟。

采用上述方法制得的胶体金清亮透明，粒径尺寸均一，无凝集颗粒，基本未发现非球形粒子。