[发明专利]疱疹病毒荧光PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，具体是一种疱疹病毒荧光PCR检测试剂盒，包括人疱疹病毒4型，也叫EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）、人疱疹病毒6型（Human herpesvirus 6，HHV-6）、人疱疹病毒7型（Human herpesvirus 7，HHV-7）荧光PCR单检及联检试剂盒。

 

背景技术

 疱疹病毒引起了许多临床重要的人类疾病。在疱疹病毒中，EB病毒属于γ疱疹病毒科，机体感染EB病毒后，可以产生传染性单核细胞增多症、EB病毒相关性噬血细胞综合征及X连锁淋巴组织增生性疾病等多种疾病。在人群中广泛感染，根据血清学调查，我国3～5岁儿童EB病毒VCA-IgG抗体阳性率达90%以上，幼儿感染后多数无明显症状，或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。青年期发生原发感染，约有50%出现传染性单核细胞增多症。主要通过唾液传播，也可经输血传染。EB病毒在口咽部上皮细胞内增殖，然后感染B淋巴细胞，这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染，并可长期潜伏在人体淋巴组织中，当机体免疫功能低下时，潜伏的EB病毒活化形成得复发感染。

EBV分离培养困难，一般用血清学方法辅助诊断。在有条件实验室可用核酸杂交和PCR等方法检测细胞内EBV基因组及其表达产物。直接检测EBV基因组或其表达产物常用Southern印迹（Southern Blot）、多聚酶链反应、免疫组织化学和原位杂交技术。由于前两种方法是非定位性的，主要用在病毒的普查、筛选和分型，后两种方法具有定位作用，能够确定病毒与组织和细胞的关系。在确定EBV与疾病的关系时，EBV潜伏膜蛋白（Latent membrane protein 1,LMP1）免疫组织化学和EB病毒早期RNA（epstein-barr virus early RNA，EBER）原位杂交已成为公认的标准方法。最好的方法是用分子生物学的方法检测生物标本（血清、骨髓、淋巴结等）中的EBV-DNA。在大部分的EBV-HLH（EB病毒感染相关的噬血细胞性淋巴组织细胞增生症）病例中，都起源一个EBV感染细胞，可以用EBV终末探针检测特异的EBV基因。

HHV-6、HHV-7属于β疱疹病毒亚科的玫瑰疹病毒属。在婴儿早期的HHV-6原发感染能够产生婴儿玫瑰疹，发病的普遍特征为持续数天的高热，并且随着发热减退出现了红疹现象。在低烧期间，患儿会在躯干、脸部出现红疹，并且蔓延到四肢的下方。HHV-6也可以导致淋巴结炎。特发性血小板减少性紫癜也与HHV-6的原发感染有关。HHV-7对儿童的原发感染会导致发热性的疾病和癫痫，并且婴儿玫瑰疹（ES）的患儿能产生中枢神经系统疾病，包括急性的偏瘫。目前实验室检测HHV-6、HHV-7的方法包括病毒分离、血清学检测、DNA检测。

最近，发明人通过大量临床样本研究发现，EBV、HHV-6、HHV-7不仅与上述症状有关，而且可能与慢性疾病有关，而检测疱疹病毒感染一般采用病毒分离、血清学及核酸检测方法。上述方法各有优缺点。病毒分离是通过直接对病原体进行分离培养，检测鉴定病毒，此方法特异性强，但操作复杂、费时，至少要花费一周时间，同时灵敏度低。对实验室生物安全条件要求非常高，所以很难在疫情发生现场采用，而且不是所有的病毒都能通过分离方法获得。血清学检查利用相应的抗体与抗原结合检测到病原体或病原体相关蛋白，此方法诊断快速、简单、易于操作，但灵敏度亦不高。核酸检测技术中PCR技术具有高特异性、高灵敏度、周期短、操作简单、成本较低等多种优点。本发明即为实现对EBV、HHV-6以及HHV-7的快速检测而设计，采用高灵敏度、高特异性、防污染的荧光定量PCR技术实现三种疱疹病毒的单重及多重检测，为三种疱疹病毒的筛查及快速鉴定提供技术保障。

发明内容

为了克服上述病毒培养分离及血清学技术缺陷，本发明的目的是提供一种疱疹病毒荧光PCR检测试剂盒及相关方法，从而使检测达到灵敏、快速、准确、节约材料和试剂的目的。

本发明目的之一是提供了一种EBV检测试剂盒，所述试剂盒包含序列如SEQ ID NO：1-2所示的引物：

EBVF：CACCGGCCCTTCTCTTTCCC；

EBVR：GGCCAGAAGCTGGGGTCTAG。

优选的，所述试剂盒还包含序列如SEQ ID NO：7所示的探针：

EBVP：CTACTCCTCTCCAACCTTCGCTCCAC。