[发明专利]一种单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株

说明书

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

背景技术

李痘病毒(Plum pox virus，PPV)是侵染核果类果树(李、桃、油桃、杏、樱桃)危险性最大的病毒之一，果树一旦受其侵染，则叶片、花、果实及果核都表现不同的症状，叶片扭曲褪绿、叶脉黄化，特别是果实变形变小，出现花斑，造成果实品质下降，未成熟果实大量脱落，使产量严重降低，甚至造成绝收，是我国的检疫性有害生物。李痘病毒的长距离扩散主要靠感染病毒的植物繁殖材料的调运。目前植物病毒的检测方法主要包括生物学、血清学和分子生物学方法。而单克隆抗体由于其是针对单一抗原决定簇产生的，所以具有特异性好的优势，为植物病毒免疫学方法的应用奠定了基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种李痘病毒单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明保护一种分泌李痘病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为3F1，已于2011年11月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.5474。

本发明还保护所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。

所述单克隆抗体在辅助鉴定李痘病毒中的应用也属于本发明的保护范围。

所述单克隆抗体在辅助鉴定待测病毒是否为李痘病毒中的应用也属于本发明的保护范围。所述待测病毒具体可为李痘病毒、马铃薯A病毒或莴苣花叶病毒。

所述单克隆抗体在辅助鉴定待测植物样本是否感染李痘病毒中的应用也属于本发明的保护范围。所述植物具体可为本生烟或昆诺藜。

本发明还保护所述单克隆抗体在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)或(c)：

(a)辅助鉴定李痘病毒；

(b)辅助鉴定待测病毒是否为李痘病毒；

(c)辅助鉴定待测植物样本是否感染李痘病毒。

所述待测病毒具体可为李痘病毒、马铃薯A病毒或莴苣花叶病毒。

所述植物具体可为本生烟或昆诺藜。

本发明还保护含有所述单克隆抗体的试剂盒；所述试剂盒的功能为如下(a)或(b)或(c)：

(a)辅助鉴定李痘病毒；

(b)辅助鉴定待测病毒是否为李痘病毒；

(c)辅助鉴定待测植物样本是否感染李痘病毒。

所述待测病毒具体可为李痘病毒、马铃薯A病毒或莴苣花叶病毒。

所述植物具体可为本生烟或昆诺藜。

本发明提供的单克隆抗体用于检测李痘病毒，具有特异性好、效价高、广谱性等优点。本发明研制的李痘病毒的单克隆抗体可用于研制李痘病毒的免疫学诊断试剂，如酶联诊断试剂，胶体金免疫试纸条，抗体芯片，生物传感器等。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。DIECA指的是二乙基二硫代氨基甲酸钠。DSMZ指的是德国微生物菌种保藏中心。ATCC指的是美国模式培养物集存库。

实施例中所用的McIlvain’s citric acid-phosphate buffer(柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液)为pH7.0、0.18mol/L的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液。实施例中所用的硼酸盐缓冲液为pH8.2、0.05mol/L的硼酸钠缓冲液。将碱性磷酸酶标记的马抗小鼠酶标抗体(购自中杉金桥公司)按照1∶1000稀释，即为实施例中的酶标二抗工作液。

本生烟(Nicotiana benthamiana)：公众可以从中国检验检疫科学研究院获得；参考文献：黄峰，陈青，陈红运，白静，李桂芬等，黄瓜绿斑驳花叶病毒低风险参照物质的研制，植物检疫，2009年第4期，第23卷，24-26页。

昆诺藜(Chenopodium quinoa)：公众可以从中国检验检疫科学研究院获得；参考文献：李桂芬，马洁，魏梅生等，番茄环斑病毒单克隆抗体的制备及检测，植物检疫，2009年第6期，第23卷，16-18页。

接种李痘病毒并发病的病叶表型为：系统花叶、皱缩症状。

接种马铃薯A病毒并发病的病叶表型为：系统花叶症状。

接种莴苣花叶病毒并发病的病叶表型为：系统褪绿斑、皱缩症状。