[发明专利]转基因玉米MON863品系特异定量PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术，涉及基因的定量的分析方法。

背景技术

国际上很多国家对转基因产品实施限量标识和进口，而我国尚无具体的转基因产品标识阈值。为了打破欧盟等国家和地区设置的转基因产品贸易技术壁垒，同时弥补和完善我国转基因生物及产品定量检测技术体系，更好地保护消费者对转基因产品的知情权和选择权，建立一种新型转基因玉米MON863品系特异定量PCR精准检测技术已成为必要。

并且目前关于转基因玉米MON863的检测技术，主要集中在普通的定性PCR方法和标准，尚无关于检测转基因玉米MON863及产品的品系特异性某特定位点（基因序列）的定量PCR精准检测技术。

发明内容

本发明的目的主要是提供一种扩增效率高、准确度高的检测转基因玉米MON863及产品的品系特异性某特定位点的定量PCR精准检测技术。

本发明通过下述技术方案实现：

转基因玉米MON863品系特异定量PCR检测方法，主要包括以下步骤：

（1）合成具有以下核苷酸序列的引物及与引物配合使用的荧光探针，

上游引物序列，Event863-F：5'-CTACTTGTTCGGATGGGTGTTC-3'

下游引物序列，Event863-R：5'-CCTTTATCGCAATGATGGCA-3'

荧光探针序列，Event863-P：5'-FAM-CCCCAAAGTGTACCAAGCTTTCCGAT-TAMRA-3'；

（2）制备MON863品系的DNA稀释液；

（3）配制PCR反应体系；

（4）定量PCR检测。

进一步，步骤（1）所述合成的引物及荧光探针的浓度都为10μmol/l，步骤（2）所述制备的DNA稀释液的浓度为50ng/μl。

为了达到最好的检测效果，步骤（3）所述的配制PCR反应体系，即将3μl的DNA稀释液加入到25μl反应体系中，所述25μl的反应体系包括以下组分：

Taqman Master mix                        12.5μl

上游引物                                 1μl

下游引物                                 1μl

荧光探针                                 0.5 μl

水                                       10ul。

作为最优的反应条件，所述PCR反应条件为：95℃预变性10min，1个循环；95℃变性15s，59℃退火60s，45个循环。

本发明具有以下优点及有益效果：

1、本发明打破了欧盟等国家和地区设置的转基因产品贸易技术壁垒。

2、本发明弥补和完善了我国转基因生物及产品定量检测技术体系。

3、本发明提供的检测技术可更好地保护消费者对转基因产品的知情权和选择权。

4、本发明扩增效率高、准确度高。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但本发明的实施方式并不限于此。

实施例

转基因玉米MON863品系特异定量PCR检测方法，主要包括以下步骤：

（1）合成具有以下核苷酸序列的引物及与引物配合使用的荧光探针，

上游引物序列，Event863-F：5'-CTACTTGTTCGGATGGGTGTTC-3'

下游引物序列，Event863-R：5'-CCTTTATCGCAATGATGGCA-3'

荧光探针序列，Event863-P：5'-FAM-CCCCAAAGTGTACCAAGCTTTCCGAT-TAMRA-3'。

本实施例引物及荧光探针合成后的浓度都为10μmol/l。

以上引物和荧光探针的核苷酸序列是针对转基因玉米MON863及产品的品系特异性某特定位点，即外源基因与玉米基因组DNA的整合位点设计，通过该设计就可以精准检测转基因玉米中MON863的转化事件。

（2）制备MON863品系的DNA稀释液；即采用常规的DNA提取手段，从转基因玉米MON863中提取出浓度为50ng/μl的DNA稀释液。